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Etude de l'efficacité des extraits de Curcuma longo, Tihonia diversifolia et de Zingiber officinale sur les micro-organismes de l'air. Cas de l'Aspergillus flavus et Aspergillus niger

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par Fabrice IMPION
Institut supérieur agro- vétérinaire de Kimwenza RDC - Ingénieur technicien en agriculture et en élevage 2010
  

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II. 2. Méthodes

II. 2. 1. Préparation du milieu de culture

Le milieu de culture PDA est favorable pour la croissance des champignons phyto - pathogènes. A chaque préparation, une dose de 0,4 g de sodium azide a été ajouté dans 1 l de milieu pour limiter les contaminations bactériennes des milieux de culture.

Voici le protocole utilisé pour la préparation de milieu de culture pour la croissance des champignons :

Constituants :

- 200 g de Pomme de terre ;

- 15 g de Dextrose ou de sucre blanc de cannes ; - 20 g d'agar - agar, gélose ou de gélatine ;

- 1 litre d'eau distillée.

Préparation :

1. Dissoudre 20g d'agar-agar dans 300 ml d'eau distillée, homogénéiser la solution.

2. Peser 200g de pomme de terre, éplucher la pomme de terre, mélanger 200g de pomme de terre bien découpé avec 300 ml d'eau distillée,

bouillir à 100° C pendant 20 à 25 minutes, ensuite recueillir l'eau de la pomme de terre environ 300 ml.

3. Le 300 ml de l'eau venant de la pomme de terre est mélangé à 300 ml de la solution agar - agar.

4. Ajuster ensuite le volume du mélange au moyen de l'eau distillée jusqu'à 1000 ml.

5. Auto - claver le mélange à la température de 125° C, la pression de 1,4 bar pendant 15 minutes.

6. Sous hotte à flux laminaire, couler la solution obtenue sur des boîtes de Pétri.

7. Laisser sécher pendant 24 à 48 heures55.

En présence de PDA de synthèse, la procédure devient simple, car il suffit de :

1. Prendre 39 gr de PDA de synthèse,

2. Le mélanger à 1 l d'eau distillée,

3. Secouer doucement jusqu'à obtenir un mélange homogène,

4. Auto - claver sous une pression de 1,4 bar à la température de 125°C durant 15 minutes,

5. Laisser refroidir un peu sous le hotte, puis couler la solution sur les boîtes de Pétri,

6. Laisser sécher pendant 24 à 48 heures56.

55 CLINIQUE DES PLANTES DE KINSHASA, 2009. « Protocole commun de laboratoire, Milieu pour la croissance des champignons », CPK Kinshasa.

56 CLINIQUE DES PLANTES DE KINSHASA, op. cit.

II. 2. 2. Préparation des bio - pesticides

1. Préparation d'extrait de Curcuma longa

Pour commencer toutes les opérations, il faut stériliser le matériel ou les mains. Et les étapes de préparation d'extrait de bio - pesticide sont les suivants :

1.

Pesage

Rinçage Broyage Récolte Emploi

Epluchage : consiste à ôter la couche superficielle du rhizome de Curcuma longa ;

2. Pesage : peser 20 gr de la biomasse des rhizomes de Curcuma longa ;

3. Rinçage : laver la quantité obtenue à l'eau ;

4. Broyage : à l'aide du pilon et du mortier en porcelaine, il suffit d'écraser pour réduire les rhizomes en petites particules pour en tirer le jus ;

5. Récolte : il suffit de presser les petites particules des rhizomes broyées pour que ressorte le jus de Curcuma longa et l'extraire à l'aide d'une pipette ;

6. Emploi : mettre dans un tube à essai pour mesurer le pH et vortexer, et sera utilisé directement.

Le jus de Curcuma longa extrait avec un pH de 7,9 sera mélangé avec 125 ml de milieu de PDA à différentes doses de la manière suivante :

- 3 ml d'extrait de Curcuma longa + 125 ml de PDA ; - 6 ml d'extrait de Curcuma longa + 125 ml de PDA et - 9 ml d'extrait de Curcuma longa + 125 ml de PDA ;

2. Préparation d'extrait de Tithonia diversifolia

Contrairement au Curcuma longa dont les rhizomes ont été utilisés, chez le Tithonia diversifolia, ce sont les feuilles qui ont été utilisées. Les opérations d'extraction du jus de Tithonia diversifolia se succèdent de la manière suivante :

1.

.

Pesage

Rinçage Broyage Récolte Emploi

Pesage : peser 20 gr de la biomasse des feuilles de Tithonia diversifolia ;

2. Rinçage : laver la quantité obtenue à l'eau ;

3. Broyage : à l'aide du pilon et du mortier en porcelaine, il suffit d'écraser pour réduire les feuilles en petites particules pour en tirer le jus ;

4. Récolte : il suffit de presser les petites particules des feuilles broyées pour que ressorte le jus de Tithonia diversifolia et l'extraire à l'aide d'une pipette ;

5. Emploi : mettre dans un tube à essai pour mesurer le pH et vortexer, et sera utilisé directement.

Le jus de Tithonia diversifolia extrait avec un pH de 6,5 sera mélangé avec 125 ml de milieu de PDA à différentes doses de la manière suivante :

- 3 ml d'extrait de Tithonia diversifolia + 125 ml de PDA ;

- 6 ml d'extrait de Tithonia diversifolia + 125 ml de PDA et - 9 ml d'extrait de Tithonia diversifolia + 125 ml de PDA ;

3. Préparation d'extrait de Zingiber officinale

Le jus de gingembre à partir de ces rhizomes sera obtenu de la manière suivante :

1.

Pesage

Rinçage Broyage Récolte Emploi

Epluchage : consiste à ôter la couche superficielle du rhizome de Zingiber officinale ;

2. Pesage : peser 20 gr de la biomasse des rhizomes de Zingiber officinale ;

3. Rinçage : laver la quantité obtenue à l'eau ;

4. Broyage : à l'aide du pilon et du mortier en porcelaine, il suffit d'écraser pour réduire les rhizomes en petites particules pour en tirer le jus ;

5. Récolte : il suffit de presser les petites particules des rhizomes broyées pour que ressorte le jus de Zingiber officinale et l'extraire à l'aide d'une pipette ;

6. Emploi : mettre dans un tube à essai pour mesurer le pH et vortexer, et sera utilisé directement.

Après extraction, le jus de Zingiber officinale a un pH de 6,4 et sera mélangé avec 125 ml de milieu de PDA à différentes doses de la manière suivante :

- 3 ml d'extrait de Zingiber officinale + 125 ml de PDA ;

- 6 ml d'extrait de Zingiber officinale + 125 ml de PDA et - 9 ml d'extrait de Zingiber officinale + 125 ml de PDA ;

Il faut noter que chaque préparation de 125 ml de milieu PDA + une dose de différent extrait de plante seront coulées dans les boîtes de Pétri en 3 répétitions.

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"Piètre disciple, qui ne surpasse pas son maitre !"   Léonard de Vinci