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Validation de procédé de production d'antigène viral sur culture cellulaire bhk21

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par Ghaith BEN MESSAOUD
Institut supérieur des technologies médicales de Tunis - Licence appliquéee en biotechnologies médicales 2013
  

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VIII.2.4. Agglutination sur latex

Les billes de latex, gélatine ainsi que le globule rouge peuvent jouer le rôle de particules révélatrices de la présence des anticorps qui vont agglutiner les antigènes recouvrant leur surface. Le recours à l'agglutination dépend de la disponibilité de l'antigène purifié (Chapel et al., 2004).

Les tests d'agglutination au latex sont particulièrement utiles pour les laboratoires de soins de santé primaires, car ils sont simples et les résultats sont faciles à interpréter. Depuis 1982, plusieurs études comparatives des tests commerciaux d'agglutination au latex pour la détection des anticorps de la rubéole ont été signalées ( León et al, 1988).

La sensibilité et la spécificité du test d'agglutination au latex étaient de 100% et 94% (Weissfeld et al., 1982).

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VIII.2.5.Hémolyse radiale (HR)

Dans le test d'hémolyse radiale pour les anticorps spécifiques du virus de la rubéole, les sérums obtenus peu après la primo-infection produisent une perturbation appelée «hémolyse ménagée». L'hémolyse ménagée est provoquée par un anticorps IgG contre le virus de la rubéole et représente un nouveau principe de sérodiagnostic. Cette technique, a coté du dosage des IgM, permet le diagnostic rapide de la rubéole récente, sur un échantillon unique de sérum (Hedman et al., 1986).

VIII.2.6.Test de neutralisation

La neutralisation du virus est définie comme la perte de pouvoir infectieux due à la réaction d'un virus avec un anticorps spécifique.

La neutralisation peut être utilisée pour identifier le virus isolé ou comme dans le cas du diagnostic de rubéole de mesurer la réponse immunitaire au virus.

Comme un test fonctionnel, la neutralisation s'est avérée très sensible, technique spécifique et fiable, mais elle ne peut être réalisée que dans des laboratoires de virologie qui comprennent seulement une petite fraction des laboratoires effectuant la sérologie de la rubéole (Mendelson et al., 2006).

VIII.2.7. Technique de fixation du complément

Le principe de la technique de fixation du complément repose sur le principe que le complément est fixé puis activé par le complexe antigène-anticorps. Après la décomplémentation du sérum à tester (pour éliminer toute source non contrôlée du complément), ce dernier est mis en présence de l'antigène viral à étudier avec une quantité définie de complément de cobaye. La réaction est révélée par l'ajout d'un second couple antigène-anticorps constitué de globules rouge revêtus d'anticorps anti-globule rouge. Si le sérum ne contient pas l'anticorps spécifique du virus à étudier le complément pout se fixer sur le second couple et entraine la lyse des globules rouges, mais si le complément est consommé par le premier couple et les globules rouges restent intacts. Ainsi l'hémolyse signifie l'absence d'anticorps (Mammette, 2002).

Les antigènes spécifiques de la rubéole utilisés pour la fixation du complément ont été synthétisés dans des cultures tissulaires de cellules RK-13 (Rabbit kidney) et des cultures primaires de rein de singe vert africain.

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Les anticorps qui fixent le complément apparaissent chez des patients atteints de rubéole peu de temps après la fin de l'éruption et persistent pendant au moins 8 mois (Sever, et al., 1965).

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