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Validation de procédé de production d'antigène viral sur culture cellulaire bhk21

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par Ghaith BEN MESSAOUD
Institut supérieur des technologies médicales de Tunis - Licence appliquéee en biotechnologies médicales 2013
  

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VII. Cellule BHK21 et multiplication du virus de la rubéole a l'échelle cellulaire

VII.1.Cellule BHK21

La souche BHK21 (baby hamster kidney ) a été isolée à partir du rein de hamster syrien. Elle possède plusieurs caractéristiques et propriétés qui font d'elle un support génétique facile dans son utilisation:

? Elle doit être facilement clonable afin d'obtenir des lignées provenant d'une cellule isolée.

? Elle doit posséder une hérédité stable, qui évolue peu au cours des divisions successives.

? Elle se cultive à la fois en tapis et en suspension.

Le caryotype de la souche BHK21 est stable. Il est très proche de celui de l'animal. Cette souche possède en total entre 43 à 44 chromosomes dans son caryotype assez difficile à distinguer par les techniques de coloration homogène.

Les conditions optimales de clonage correspondent à un pH de 7,2 et une température de 37°C.

Les milieux MEM et 199 ne permettent pas un clonage correct de la souche BHK21 (efficacité d'étalement inférieure à 1/100). Seul le milieu MEM complémenté avec les acides aminés non essentiels permet cette croissance clonale en présence de sérum foetal bovin. Le temps de dédoublement des cellules est 14 heures (Caboche et al., 1973).

Les cellules BHK21 se multiplient rapidement au cours de 48 premières heures et font une couche complète et confluente pour une incubation de 72 heures (Rahman et al., 2007).

VII.2. Multiplication du virus de la rubéole a l'échelle cellulaire

La multiplication du virus se fait dans le cytoplasme. L'ARN du virus va servir de messager. Il y a formation d'un intermédiaire de réplication. L'ARN est encapsidé et les virions acquièrent leur peplos par le phénomène de bourgeonnement grâce à la membrane

ISTMT-IPT 2012-2013

cytoplasmique ou dans les vacuoles intracytoplasmiques et libérées dans le milieu extérieur.

L'hémagglutinine présenté sur le peplos apparait sur les bourgeons de la membrane cytoplasmique. Dans ce cas il est possible de faire une hemadsorption surtout sur les cellules VERO (lignée cellulaire provenant de rein de singe cercopithèque) ou BHK21 (Huraux et al., 1991).

Figure 8: Détection du virion de la rubéole dans

les cellules BHK21 (Risco et al., 2003) Figure 9: Cellules VERO et BHK21 infectées par

le virus de la rubéole. (Risco et al., 2003)

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