II.3.2. Toxicité orale subchronique
La toxicité orale subchronique de l'extrait aqueux du
mélange de A. melegueta, de M. whitei, de P.
guineense, et de Z. officinale à été
évaluée chez le rat conformément à la ligne
directrice n° 407 de l'OCDE pour les essais de produits chimiques
adoptée le 3 octobre 2008.
II.3.2.1. Nombre et sexe des animaux
10 animaux (5 par sexe) (poids : 84-113 g pour les
femelles et 105-134 g pour les mâles ; âge : 6-7
semaines) ont été utilisés pour chaque dose.
II.3.2.2. Dosage
Trois doses (100, 200, 400mg/kg) et un groupe témoin
ont été utilisés. Les doses ont été choisies
sur la base de l'estimation de la dose thérapeutique chez l'Homme. Le
traitement chez l'Homme préconise l'ingestion du macérât
aqueux d'environ 11 g de poudre du mélange de plantes par jour pendant 8
jours. En considérant que le poids biologique moyen d'un être
humain est de 70 kg, et que la quantité d'extrait aqueux que l'on peut
théoriquement obtenir par macération à partir de ces 11 g
de poudre est d'environ 2 g (rendement 18 %), le traitement chez l'Homme
consiste en l'ingestion quotidienne d'un peu moins de 30 mg/kg de poids
corporel d'extrait aqueux pendant 8 jours. Cette valeur à
été multiplié par 3 pour pallier à une
différence de biodisponibilité éventuelle existant entre
l'Homme et les rats de laboratoires, soit une valeur obtenue d'environ 90
mg/kg. La valeur de 100 mg/kg à finalement été choisi
comme dose minimale, correspondant à l'estimation maximale de la dose
pharmacologique chez le rat. Cette valeur a été multipliée
par 2, puis par 4, pour trouver respectivement la dose intermédiaire et
la dose maximale.
II.3.2.3. Administration de la substance d'essai
Les animaux ont reçu par gavage à l'aide d'une
sonde oesophagienne une dose quotidienne de la substance d'essai pendant 33
jours conformément aux recommandations de l'OMS sur la durée des
études de toxicité d'une substance chez l'animal en fonction de
l'administration clinique prévue (OMS, 2000). Les séances de
gavage étaient menées au même moment de la journée.
Les quantités d'extrait à administrer étaient
régulièrement ajustées pour rester constante par rapport
au poids de l'animal. Le groupe témoin recevait le plus grand volume
d'eau distillée utilisé.
II.3.2.4. Observations
La période d'observation a duré 33 jours. Deux
fois par jour au minimum, au début et à la fin de chaque
journée, un examen de tous les animaux avait lieu, afin d'y
déceler des symptômes de morbidité et de mortalité.
Des observations ont été faites sur tous les animaux au moins une
fois avant la première exposition (pour pouvoir effectuer des
comparaisons sur un même individu), et ensuite une fois par semaine. Les
symptômes relevés incluaient, de façon non limitative, les
changements affectant la peau, la fourrure, la respiration, la démarche,
de stéréotypes (par exemple, soins corporels excessifs, animaux
tournant en rond de façon répétitive) et de comportements
bizarres (par exemple, automutilation, marche à reculons). A partir de
la quatrième semaine d'exposition, la réactivité
sensorielle à des stimuli auditifs et proprioceptifs, la force de
préhension, et l'activité motrice ont été
évaluées quotidiennement :
· l'audition était évaluée en
appréciant la réaction des animaux à un claquement
brusque des mains ;
· la proprioception en appréciant leur
réaction à une piqure de leurs pattes ;
· la force de préhension en appréciant leur
capacité à s'agripper aux bords de la cage lorsqu'on essayait de
les en sortir.
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