II.3.2.7. Pathologie
Ø Autopsie générale :
Tous les animaux de l'étude ont fait l'objet d'une autopsie
générale. Le foie, les reins, les poumons, la rate, les gonades
et le coeur de tous les animaux (à l'exception des animaux
sacrifiés ou mort avant la fin de l'essai) ont été
débarrassés de tout tissu adhérent et pesés
à l'état frais aussitôt après la dissection, afin
d'éviter leur dessiccation. Après la pesée, ces organes
ont été conservés dans du liquide de Bouin aqueux fort
pour les examens histopathologiques. Le poids relatif du foie, des reins, des
poumons, de la rate, des gonades, et du coeur a été
déterminé par la formule :
Ø Histopathologie : Les organes
d'intérêts ont été conservés dans du Bouin
aqueux fort pour y être fixés. Le liquide de Bouin aqueux fort a
été obtenu après mélange
homogénéisé des substances suivantes : Acide
acétique glacial (1 volume), Formol pur du commerce (5 volumes), Acide
picrique à saturation dans l'eau (15 volumes). Le mode
opératoire suivant a ensuite été employé pour la
réalisation des coupes histologiques :
1)- « Trimming » : des
tranches fines et régulières de chaque organe fixé ont
été prélevées à l'aide d'un bistouri, puis
rangées dans des cassettes.
2)- Déshydratation :les cassettes ont
ensuite été passées dans des bains d'éthanol de
concentration croissante : éthanol 50° (1h) ? éthanol
70° (1h) ? éthanol 95° n°1 (1h) ? éthanol 95°
n°2 (1h30mn) ? éthanol 100° n°1 (1h) ? éthanol
100°n°2 (1h30mn) ? éthanol 100°n°3 (2h) ; les
cassettes ont ensuite été passées dans 2 bains de
xylènes respectivement 1h et 2h ; les cassettes ont enfin
été passées dans 3 bains de paraffine à 60°C
respectivement 1h, 1h30 et 2h.
3)- Inclusion :les tissus ont ensuite
été placés dans des moules remplis de paraffine en fusion
qui a ensuite été mise à solidifier sur une surface froide
après orientation appropriée du tissu dans le bloc.
4)- Coupes :des coupes de 5 um des blocs ont
été réalisée à l'aide d'un microtome. Une
fois coupées, les sections ont été mises à
déplissées dans un bain-marie (environ 40°C) puis
récupérées sur des lames. Les lames ont ensuite
été laissées 24h à l'étuve (45°C) avant
la coloration.
5)- Coloration :les coupes ont ensuite
été passées dans une batterie de déparaffinage
constituée d'une série de bains de 5 à 10 mn chacun selon
la séquence suivante : xylène n°1 ? xylène
n°2 ? xylène n°3 ? éthanol à 100° n°1
? éthanol à 100° n°2 ? éthanol à
100° n°3 ? éthanol à 95° ? éthanol à
70° ? eau distillée. Les coupes ont ensuite été
immergées 10 mn dans un bac contenant de l'hématoxyline de Mayer,
puis rincées pendant 10 mn à l'eau du robinet courante. Les
coupes ont ensuite été passées dans un bain
d'éthanol 95° pendant 5 mn, puis elles ont été
immergées 5 mn dans de l'éosine alcoolique 0,5% + 40 ul d'acide
acétique par 100 ml de solution. Les coupes ont ensuite
été déshydratées dans de l'éthanol 100°
(3 × 5 mn), éclaircies dans du xylène (3 × 5 mn).
6)- Montage :une fois sortie du xylène,
quelques gouttes de résine ont été déposées
sur les coupes, puis ces dernières ont été recouvertes
d'une lamelle de verre pour l'observation au microscope.
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