3. Préparation de la semence
La semence est obtenue après récolte, examen,
dilution et conditionnement du sperme. Une bonne qualité de la semence
est indispensable pour optimiser le taux de réussite de l'IA.
3.1. Récolte du sperme
3.1.1. Récolte au moyen du vagin
artificiel
Cette méthode a été mise au point en 1914
par AMANIGA sur le chien. Elle fut améliorée par la suite par
KAMAROU NAGAEN en 1930 pour le taureau. Le modèle de vagin actuellement
utilisé a été mis au point par WALTON en 1940 (Figures 5
et 6).
Figure 5: Vagin artificiel Figure 6 : Vagin artificiel,
coupe longitudinale
Cette méthode consiste à faire éjaculer
le taureau dans un vagin artificiel au moment de la monte sur une vache en
chaleurs ou non, sur un autre taureau ou sur un mannequin (figure 7). Le vagin
artificiel offre toutes les conditions du vagin naturel au moment du coït
; la température doit être d'environ 40 à 42°C, la
pression est assurée par insufflation de l'eau tiède par
l'orifice du robinet, la lubrification doit être faite par une substance
insoluble dans le plasma séminal et non toxique pour le sperme.
Figure 7 : Collecte de la semence au moyen du vagin
artificiel Source : R.G. Elmore, 1996.
3.1.2. Electro-éjaculation
L'électro-éjaculation est une méthode de
récolte de sperme par stimulation des vésicules séminales
et des canaux déférents à l'aide d'électrodes
bipolaires implantées par voie rectale permettant d'obtenir
l'érection et l'éjaculation. Cette méthode permet
d'obtenir régulièrement les sécrétions accessoires
puis, le sperme pur, riche en spermatozoïdes (MBAINDINGATOLOUM,
1982). Les figures 8 et 9 montrent la sonde et la méthode
d'électro-éjaculation.
Figure 8 : Electro-éjaculation Figure 9 :
Sonde d'électro éjaculation
Source : R.G. Elmore ,1996. Source : R.G. Elmore,
1996.
3.2. Examen du sperme
L'examen du sperme a pour objectif d'apprécier la
qualité et la quantité du sperme pour son utilisation en
situation artificielle.
3.2.1. Examen macroscopique de la semence
Cet examen permet d'apprécier son volume, sa couleur et
son aspect général -Le volume varie de 0,5 à 15 ml ;
-La couleur et l'aspect général : le sperme est
blanchâtre de consistance lactocrémeuse. Il ne doit y avoir ni de
trace de sang ni de pus. Les vagues macroscopiques des spermatozoïdes
permettent l'appréciation de l'aspect général des
spermatozoïdes.
3.2.2. Examen microscopique
Il permet d'apprécier la motilité, la
concentration en spermatozoïdes et la morphologie des spermatozoïdes
d'un échantillon. La motilité des spermatozoïdes est
estimée à l'aide d'un microscope à plaque chauffante
(37°C) immédiatement après son prélèvement. Il
faut distinguer la motilité massale et la motilité
individuelle.
La motilité massale se fait à faible
grossissement (x100 à x 200). Elle détermine la proportion de
spermatozoïdes mobiles. Elle est affectée d'une note de 0 à
5 variant selon l'ampleur des vagues ondulatoires (Tableau IV):
Tableau IV : Motilité massale du
sperme
|
Motilité
|
Note
|
|
Absence de mouvement
|
1
|
|
Mouvement net sans vague
|
2
|
|
Début de vague
|
3
|
|
Vague très net
|
4
|
|
Tourbillon
|
5
|
La motilité individuelle est réalisée au
fort grossissement (x400). Elle permet d'évaluer le pourcentage de
spermatozoïdes mobiles. Ne seront retenues que des semences ayant au moins
60% de spermatozoïdes mobiles.
L'appréciation et la notation de la semence sont faites
à partir d'une grille d'appréciation de la motilité
(Tableau V). Les éjaculats de notes supérieures à 3 sont
retenus.
Tableau V: Grille d'appréciation de la
motilité
|
Note
|
Appréciation des spermatozoïdes
|
|
0
|
Absence de spermatozoïdes (azoospermie)
|
|
1
|
Absence de spermatozoïdes vivants
|
|
2
|
25 % de spermatozoïdes vivants
|
|
3
|
50 % de spermatozoïdes mobiles
|
|
4
|
75% de spermatozoïdes mobiles
|
|
5
|
100 % de spermatozoïdes mobiles en ligne droite
|
Un échantillon de 0,1 ml de sperme est diluée au
100ème dans du sérum physiologique formolé
à 2%. Le comptage de spermatozoïdes se fait à l'aide d'un
hématimètre ou un photomètre. La concentration moyenne est
de 1 000 000 000 de spermatozoïdes/ml.
L'étude morphologique se fait après la
coloration à l'encre de chine ou à l'éosinenigrosine, afin
de détecter les anomalies de forme de la tête et de la queue du
spermatozoïde (duplication de la tête, macrocéphalie, queue
courte ou enroulée, duplication de la queue). Ne sont retenus pour l'IA
que les spermes ayant moins de 25% de spermatozoïdes anormaux et plus de
60% de spermatozoïdes vivants (PAREZ et DUPLAN, 1987).
3.2.3. Examen biochimique
Cet examen porte sur le pH du sperme frais et l'activité
métabolique des spermatozoïdes. Le pH du sperme normal est de 6,2
à 6,6.
L'étude de l'activité métabolique utilise
plusieurs tests dont le plus répandu est l'épreuve à la
réductase. Il consiste à déterminer le temps mis par un
échantillon de sperme pour décolorer une certaine quantité
de bleu de méthylène. Plus ce temps est long, plus la
qualité est réduite.
Au total un bon sperme doit être blanchâtre de
consistance lacto-crémeuse, avoir
une bonne motilité massale
et une bonne motilité individuelle (> 3). Il doit avoir
une concentration moyenne 1 000 000 000 de spermatozoïdes/ml
avec au moins 60% de spermatozoïdes vivants.
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