3.3. Dilution du sperme
Le sperme récolté contient un nombre de
spermatozoïdes supérieur à ce qui est requis pour une
fécondation, et peut donc être dilué avant utilisation en
semence fraiche ou congelé. Cela permet d'une part d'accroître le
nombre de femelles à inséminer avec une récolte, et
d'autre part d'incorporer des conservateurs pour protéger les
spermatozoïdes lors des différentes opérations de
congélation.
La dilution se fait en deux temps : la prédilution et la
dilution finale.
La prédilution consiste à ajouter au sperme
récolté la moitié du volume total du dilueur non
glycérolé puis le refroidir à 4°C pendant 30
minutes.
La dilution finale quant à elle, consiste à
ajouter goutte à goutte au sperme prédilué, le dilueur
à 7,5 ou 9 % de glycérol. L'objectif de cette rigueur est
d'éviter le choc thermique. Les dilueurs les plus utilisés sont
à base de lait ou de jaune d'oeufs (Tableau VI). Néanmoins les
dilueurs à base de LDL (Low density lipoprotein) extraits du jaune
d'oeuf seraient les meilleurs (AMIRAL et al. 2004).
Tableau VI: Composition de dilueurs à base de
jaune d'oeuf et à base de lait
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Milieu citrate jaune d'oeuf
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Milieu à base de lait
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Citrate de soude 3,6 %
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Lait 54 %
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Jaune d'oeuf 20 %
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Jaune d'oeuf 10 %
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Glycérol 7,5 %
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Glycérol 6 %
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Pénicilline 500 000 I
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Deshydrostreptomycine 1
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Streptomycine 0,5 g
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(Source : NAGASE et NIWA, 1968)
3.4. Conditionnement et conservation
3.4.1. Conditionnement
Le sperme dilué en doses est conditionné en
paillette de CASSOU avant d'être
congelé. Il est recommandé d'avoir 15 000 000 de
spermatozoïdes par dose fécondante.
3.4.2. Conservation par congélation
Le principe de la conservation consiste à placer les
paillettes sur une rampe métallique à 5°C, puis dans un
récipient cryogénique (-196°C) en contact avec les vapeurs
de l'azote liquide. Enfin, le contrôle qualité est effectué
avant sa mise dans des bonbonnes d'azote liquide à - 196°C.
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