deuxième tube (-2). Des opérations successives de
ce genre permettent d'obtenir des dilutions (-3) et (-4).
- pour le dénombrement de la flore mésophile
totale, 1 ml l'inoculum de chaque dilution par procédé est
introduit dans des boîtes de Pétri codées
conformément au codage pratiqué sur les tubes de dilution. Couler
ensuite 15-20 ml du milieu gélosé en surfusion (40 à
45°C) bien homogénéiser dans chaque boîte de
pétrie en l'entrouvrant. Refermer aussitôt, imprimer à la
boîte des mouvements rotatoires dans le sens de rotation des aiguilles
d'une montre et dans le sens contraire afin d'obtenir un mélange
homogène de l'inoculum avec le milieu de culture gélosé
(PCA). Enfin environ 10 ml gélose blanche est coulée en
surface.
- pour le dénombrement des levures et moisiss ures, 15
à 20 ml du milieu OGA sont coulés dans les boîtes de
pétri codées conformément au codage pratiqué sur
les tubes de dilution. Ensuite 0,1 ml de l'inoculum est coulé puis
étalé en surface à l'aide d'un étaleur (pipette
râteau).
- pour le dénombrement des Staphylocoques, 15 à
20 ml du milieu Baird Parker sont coulés dans les boîtes de
pétri codées conformément au codage pratiqué sur
les tubes de dilution. Ensuite 0,1 ml de l'inoculum est coulé puis
étalé en surface à l'aide d'un étaleur (pipette
râteau).
- pour le dénombrement des coliformes totaux et
fécaux, 15 à 20 ml du milieu VRBLA est coulé dans les
boites de pétri codées conformément au codage
pratiqué sur les tubes de dilution. Ensuite 1 ml
30
de l'inoculum de chaque dilution par procédé
est introduit dans des boîtes de pétri puis recouvrir après
solidification environ 5 à 10 ml de la gélose blanche.
- pour le dénombrement des Anaérobie
Sulfito-Réducteurs (ASR),
1 ml de l'inoculum de chaque dilution par
procédé est introduit dans des boîtes de Pétri ,15
à 20 ml du milieu BSA est ensuite coulé dans ces boites de
Pétri codées conformément au codage pratiqué sur
les tubes de dilution.
Toutes ces opérations se font dans les conditions
d'asepsie totale. Après solidification, toutes les boîtes de
pétrie ensemencées sont retournées avec soins pour
éviter quelles s'ouvrent et soit contaminées
Incubation
Les boîtes de Pétri sont placées, dans
l'incubateur avec des paramètres d'incubations appropriés
à chaque microorganisme recherché
- Germes Aérobies Mésophiles
(GAM) : 30°C pendant 72h
- Anaérobie Sulfito-Réducteurs (ASR) :
44°C pendant 24h à 48h
- Coliformes totaux : 30°C pendant 24h à
48h
- Coliformes fécaux : 44°C pendant 24h
à 48h
- Staphylococcus aureus : 30°C pendant 24 à
48h
- Levures et moisis sures : 25°C pendant 3
à 4 jours.
Analyses Physico-chimiques
Les analyses physico-chimiques sont effectuées dans le
but d'évaluer la teneur en protéine, en humidité, et la
cendre.
31
L'humidité : c'est la teneur de
l'eau contenu dans un aliment. Mode Opératoire :
Le mode opératoire est une technique qui consiste
après séchage à l'étuve pendant une heure des
boites de Pétri vide, de peser 10 kg des échantillons de chaque
procédé de ces boites de Pétri avant d'être
lancées à l'étuve. Tout l'ensemble, heures une 1
ère
après t rois sera
fois, pesé et retourné à l'étuve
et 45 minutes après pour une 2nde fois. Toutes ces techniques
visent essentiellement à maintenir une masse constante. Cette
dernière se détermine suivant la formule ci après :
(Mo + Me)- Mf
H = × 100
Me
Mo : masse à vide de la boîte de
pétri
Me : masse de l'échantillon
Mf = masse à vide de la boîte de pétri plus
celle de l'échantillon.
Cendre : c'est l'ensemble des
minéraux que renferme un produit Mode opératoire :
Le mode opératoire consiste à conditionner les
creusets au four à moufle à une température de 50°C
pendant une heure afin d'éliminer les matières grasses que
contiendraient les creusets. Après le conditionnement et refroidissement
par le dessiccateur ; ils sont pesés à vide ensuite 5g des
échantillons de chaque procédé sont pesés dans les
creusets puis laissés au four à moufle à une
température de 50°C, toutes
32
les 25 minutes la température est augmentée de
50°C jusqu'à atteindre une température 550°C ;
température à laquelle l'ensemble est laissé pendant 8
heures. Après ce temps le creuset et la cendre seront pesés.
La teneur en cendre se détermine par la formule suivante
:
Mf - Mo
C = × 100
Me
Mo : masse à vide du creuset
Me : masse de l'échantillon
Mf = masse à vide du creuset plus celle de
l'échantillon.
· La teneur en Protéine : c'est la masse brute
de protéine contenue dans un produit.
Mode opératoire :
Le mode opératoire consiste :
- pré- chauffage du bloque de minéralisation
pendant 40 minutes
- placer dans les tubes à minéralisation, 0.5g
toute contenue et homogénéiser l'échantillon de
façon que la quantité d'ammonium dégagée
corresponde à 25 ml d'acide sulfurique 0,05M.
- ajouter un comprimé de catalyseur
- ajouter 10ml d'acide puis agiter doucement d'un mouvement
circulaire
- ajouter 5ml de peroxyde d'hydrogène en solution
à 30 %
- placer les tubes sur le banc de chauffage
33
- laisser la réaction se faire pendant 45 minutes
- enlever les tubes et laisser refroidir sur son pied pendant 5
minutes
- ajouter 50 ml d'eau distillée et mélanger
- placer 25 ml d'acide borique 4 % dans le flacon
récepteur et le mettre en place sur l'unité de distillation
- mettre le tube contenant la prise d'essai minérale
et ajouter la soude concentrée en quantité suffisante pour rendre
le milieu suffisamment basique
- ajouter quelques gouttes d'indicateur de rouge méthyle
puis commencer l'entraînement à la vapeur
- après recueillir un volume de 200ml du distillat
- ajouter cinq gouttes d'indicateur mixte de dosage de
l'ammoniac
- doser avec de l'acide sulfurique H2SO4 0,05M jusqu'au virage
de la couleur violet
- faire la même réaction à blanc.
La teneur en protéine se détermine par la formule
suivante :
V × 0,05 × 2 ×10-3 ×14
Pourcentage en azote N = ×100
Me
0,14 ×V
Pourcentage en azote N = ×100
Me
Avec Me : masse de l'échantillon
V : le volume de l'acide sulfurique
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RESULTATS ET DISCUSSIONS
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