3) Conclusions
La stratégie de surexpression du domaine K2
dans le cadre d'une facilité de production à moyen
débit s'est avérée très fructueuse. En effet, le
criblage systématique de plusieurs conditions d'expression en amont
de la production à grande échelle a permis d'augmenter les
chances de déterminer une condition qui réponde aux exigences
inhérentes à l'étude par RMN. Ainsi, nous avons
préparé une quantité suffisante de protéine
soluble simplement marquée 15N, et doublement
marquée 15N / 13C, pour envisager une
attribution complète des noyaux 1H, 15N, et
13C du domaine K2 (3 tubes simplement marqués 15N
à ~0.8 mM, et 3 tubes doublement marqués 15N /
13C à ~ 0.7 mM). De plus, les différentes analyses
qui ont été menées montrent que la
protéine est pure, stable, et structurée. D'un point de vue
matériel, l'optimisation de l'expression en milieux marqués,
associée aux choix portés sur les méthodes de
purification, ont permis de réduire le coût de production
des échantillons, qui reste cependant très onéreux.
Au cours de cette étude préliminaire,
nous avons également caractérisé une organisation
monomérique du domaine K2 dans des conditions chimiques proches
de l'échantillon RMN. Et enfin, nous avons optimisé les
conditions de l'analyse RMN avant d'aborder une caractérisation
structurale complète par RMN et modélisation moléculaire
qui
fait l'objet du prochain chapitre.
Chapitre 3 : Stratégie d'étude par RMN et
Modélisation Moléculaire du domaine K2
| 
