Evaluation du risque hypercholestérolémique chez les membres des familles de diabétiques. Cas de centre diabétologique Boyambi en RDC

CHAPITRE III : MATERIEL ET METHODES.

III.1 MATERIEL.

III.1.1 Les spécimens biologiques.

Les échantillons de sérums sanguins des individus non diabétiques issus de familles dont un proche parent est diabétique connu et déclaré, ont été obtenus au centre diabétologique BOYAMBI (Armée du Salut) sis croisement des avenues Rwakadingi et Kasaï dans la commune de Gombe à Kinshasa soit 67 échantillons dont 33 femmes et 34 hommes.

Les échantillons sanguins d'un groupe des sujets témoins dont le proche parent n'a pas le diabète sucré ont été fournis par le laboratoire du service médical de la commission électorale indépendante. Nous avons totalisé 40 échantillons repartis comme suit :

- 20 échantillons des femmes non diabétiques sans proche parent diabétique connu ni déclaré.

- 20 échantillons des hommes non diabétiques sans proche parent diabétique connu ni déclaré.

- Les sérums frais ont été repartis en aliquotes puis gardés dans le congélateur dans les cas oû les analyses ne sont pas faites le même jour.

III.1.2 Matériel et équipements du laboratoire.

- Spectrophotomètre : Spectrum SAFAS monaco. ^R

- Vortex de marque Cyan CL001. ^R

- Bain marie : Memmert type, W B-7 .^R

- Centrifugeuse électrique : Selecta centro-8. ^R

- Frigo : Apollo Brandt. ^R

- Poupinel : Memmert .^R

- Micropipettes Huawei ^R de 10-200ìl, 100-1000ìl.

- Micropipettes Humapette ^R de 500ìl.

- Embouts bleus et jaunes Cypress ^R de 1000ìl et de 1-200ìl.

- Pissette de 1000ml.

- Portoir pour tubes à essai.

- Tubes à essai.

- Papier Joseph .^R

- Aiguilles Vacutainer ^R G21.

- Pipettes graduées en verre de 5 ml, 10ml.

III.1.3 Réactifs.

Nous avons utilisé spécialement des réactifs prêts jà l'emploi de la firme FORTRESS diagnostics^R, présentés sous forme de kits dont voici les compositions :

a. Cholestérol total : CHOD-PAP (lyophilisé).

FORTRESS diagnostics^R, kit référence : BXC0261D.

Le kit comprend :

R1solution tampon :

· Pipes buffer «« ~ 50mmol/l

· Phénol K «««« «« ~ 6.0mmol/l
R2 Réactif lyophilisé :

· 4-amino-antipyrine«««««««««««~ 0.3mmol/l

· Cholestérol oxydase««««««««««~.. > 100UI

· Cholestérol Estérase««««««««««~.. > 150UI

· Cholestérol Estérase««««««««««~.. > 150UI

· Peroxydase««««««««««««««~ > 800UI R4 Standard :

· Etalon de cholestérol K « ~. 200mg/dl ou 5.17mmol/l

b. HDL-Cholestérol : précipitant.

FORTRESS diagnostics ^R, kit référence : BXC0422A.

Pour obtenir la séparation des lipoprotéines de haute densité et dosage du cholestérol et des phospholipides liés à ces fractions.

Le kit comprend :

Réactif précipitant(R1) :

· Acide phosphotungstique «««« ««««~.. 0.55mmol/l (40g/l)

· MgCl2.6H2O pH 6,2 ~««« ««««~...25mmol/l (100g/l)
Réactif 2(R4) : Standard HDL-Cholestérol

· Cholestérol libre +cholestérol estérifié «« ~. 1,3mmol/l ou 0,5g/l.

c. LDL-Cholestérol : précipitant.

FORTRESS diagnostics ^R, kit référence : BXC0432A.

Le kit comprend :

Réactif (R1) : précipitant

· Citrate de sodium pH 5,04««««««««««««« 0,064mmol/l Standard (R4) :

· LDL-Cholestérol. «««« «« ~.5.17mmol /l (soit 200mg/dl)