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Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

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par Antoine A. & Fêmi Jacques H. DANSOU & SETONDJI
Université d'Abomey- Calavi au Bénin - Licence professionnelle en analyses biomédicales 2008
  

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II- METHODES

II-1- TECHNIQUE DE PREPARATION DE LA GELOSE CHOCOLAT

II-1-1- A partir du trypcase-soja et de l'hémoglobine en granulées

La gélose trypcase-soja est utilisée à double concentration.

-Mettre en suspension 16g de la gélose TSA dans 200mL d'eau distillée dans une casserole et bien homogénéiser.

-Chauffer à l'aide de la flamme du bec bunsen jusqu'à la dissolution complète en agitant fréquemment avec une baguette.

-Laisser bouillir 1 à 2 minutes.

-Repartir la solution dans des flacons stériles.

-Mettre en suspension dans un flacon stérile 4g d'hémoglobine en granulées soluble dans 200mL d'eau distillée. Mélanger l'hémoglobine avec quelques millilitres d'eau distillée jusqu'à l'obtention d'une pâte lisse. Tout en mélangeant, ajouter progressivement l'eau distillée restante jusqu'à la formation d'une solution homogène.

-Autoclaver les flacons à 121°C pendant 45 minutes puis les ramenés à 50°C.

-Ajouter aseptiquement 200mL de la solution d'hémoglobine, 4mL de polyvitex (soit 1mL de polyvitex pour 100mL de milieu) à 200mL de la solution de base TSA.

-Mélanger délicatement, mais soigneusement pour éviter la formation de bulles d'air dans la gélose (Faire de lent mouvement de 8 sur la paillasse).

-Couler la gélose dans des boites de Pétri avec une épaisseur de 4mm. -Laisser solidifier à la température ambiante.

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

-Emballer les boites coulées dans un papier aluminium et conserver à 4°C pour une utilisation ultérieure.

II-1-2- A partir de la gélose trypcase-soja et du sang de mouton défibriné

-Mettre en suspension 16g de la gélose TSA dans 400mL d'eau distillée et bien homogénéiser.

-Chauffer à l'aide de la flamme du bec bunsen jusqu'à dissolution complète en agitant fréquemment avec une baguette.

-Laisser bouillir 1 à 2 minutes.

-Le répartir dans un flacon stérile.

-Autoclaver à 121°C pendant 45 minutes puis laisser refroidir à 50°C. -Ajouter 20mL du sang de mouton défibriné.

-Placer le mélange au bain-marie à 80°C pendant 15 minutes tout en homogénéisant de temps en temps.

-Ramener à 50°C et ajouter 4mL de polyvitex.

-Mélanger les ingrédients en évitant la formation de bulles d'air.

-Couler la gélose dans des boîtes de Pétri avec une épaisseur de 4 mm. -Laisser solidifier à la température ambiante.

-Emballer dans un papier aluminium et conserver à 4°C pour une utilisation ultérieure.

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

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