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Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

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par Antoine A. & Fêmi Jacques H. DANSOU & SETONDJI
Université d'Abomey- Calavi au Bénin - Licence professionnelle en analyses biomédicales 2008
  

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II-2-CONTROLE DE STERILITE

Après la préparation des milieux, nous avons incubé une de chacune des boîtes coulées à l'étuve pendant 24 heures.

La présence de souillure entraîne le rejet de la gélose.

II-3- REPIQUAGE DES SOUCHES

A partir des souches précédemment retenues, sept boites de gélose chocolat du laboratoire ont été ensemencées. L'inoculum utilisé a été ensemencé de telle sorte que le tiers de chaque plaque de gélose ait été ensemencé en stries serrées puis le reste en stries de manière à obtenir des colonies isolées. Les plaques de gélose ont été placées en anaérobiose et incubées à 35°C pendant 24 heures.

II-4- CONTROLE DES SOUCHES

Un contrôle a été réalisé sur les colonies qui se sont développées sur la gélose chocolat. Pour ce faire des frottis ont été réalisés puis colorés au Gram.

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

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II-5- REALISATION DES SUSPENSIONS ET CULTURES

II-5-1- Réalisation des suspensions

Pour chacune des espèces, nous avons réalisé une suspension en prenant une colonie qui a été émulsionnée dans 10mL d'eau physiologique stérile. A partir de cette suspension deux dilutions dont l'une à 10-1 et l'autre à 10-2 ont été réalisées (Figure 3 page 25).

10mL d'eau

9mL d'eau

1mL 1mL

9mL d'eau

Physiologique physiologique physiologique

stérile stérile stérile

Suspension Suspension Suspension

initiale au 1/10ème au 1/100ème

Figure 1 : Réalisation de suspension et des dilutions 10-1 et 10-2

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

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II-5-2- Culture

A partir de chacune des suspensions et des dilutions, nous avons ensemencé des plaques de gélose chocolat à base de l'hémoglobine en granulées et de gélose chocolat à base du sang de mouton défibriné.

Technique

-Disposer les plaques de gélose à ensemencer sur la paillasse.

-Diviser les plaques de gélose par le dos de la boite de Petri en trois bandes parallèles au moyen d'un marqueur.

-Numéroter les bandes : 1, 2 et 3.

-Ensemencer la suspension initiale sur la bande 1, la dilution 10-1 sur la

bande 2.et la dilution 10-2 sur la bande 3.

-Incuber à 35°C en anaérobiose pendant 24 heures.

Après incubation, la densité des colonies sur les plaques de gélose a été évaluée à l'aide d'une carte modèle d'identification de la densité des colonies pour la numération des bactéries (Voir annexe1).

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