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La cytogénétique et classification des hémopathies malignes

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par Achouria BOURIACH
Universdité d'Oran - Algérie - Diplôme des études supérieures en génétique 2012
  

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1.3.2.3.1 Princibe .

mique sont indiquées chromosome

omes homologues.

2004.

Le principe général de la FISH est illustré par la (figure 20).

Les techniques d'hybridation in situ sont fondées sur la propriété de réassociation spécifique des acides nucléiques. Une sonde dénaturée (ADN simple brin marqué) en solution peut s'hybrider spécifiquement avec sa séquence cible (préparation chromosomique dénaturée) grâce à la complémentarité des bases nucléotidiques. La sonde s'apparie par des liaisons hydrogène établies selon les critères de Watson et Crick. Les hybrides infidèles et les molécules de sonde non hybridées sont éliminés par l

avages, puis les hybrides spécifiques sont révélés, en général par immunodétection et enfin l'observation s'effectue grâce à un microscope à épifluorescence. L'introduction de marqueurs

non radioactifs a permis de s'affranchir de la lourdeur des techniques utilisant des radio-isotopes réservés aux laboratoires de recherche. De nombreuses améliorations ont permis d'obtenir une qualité et une reproductibilité remarquable (sondes clonées, amélioration des solutions d'hybridation....). Son utilisation pratique est relativement facile et rapide.

II.3.2.3.2 Diversité des sondes :

De nombreuses sondes sont actuellement disponibles et commercialisées, elles sont principalement de 4 types : (figure 22

- peinture chromosomique (spécifique d'un chromosome entier ; figure A et E),

- locus spécifique (correspondant à un petit fragment chromosomique ; figures B et F)

- télomérique (figure C),

- centromérique (figure D)

En dehors d'applications particulières telle que l'HCG dont la sonde correspond à un génome entier, l'ADN est obtenu après clonage dans un vecteur ou par synthèse in vitro (tableau IV). Une méthode permet par diverses approches d'obtenir un caryotype "en couleur" grâce à l'utilisation de l'informatique et du traitement d'image : chaque chromosome est repéré par une

combinaison spécifique de fluorochromes et donc une couleur qui lui est spécifique (Multi-FISH, Planche I, Figure E).

Tableau IV : différents types de sondes avec indication des tailles maximales
M.jeaunepier et al. GENETIQUE MEDICAL ; ISBN2 29400812X ; 2004.

11.3.2.3.3 Marquage des sondes :

Pour permettre leur détection spécifique les sondes sont marquées soit par des procédés

enzymatiques (figure 21) par introduction d'haptène (biotine, digoxigénine), soit par procédés chimiques. Actuellement de nombreux fournisseurs proposent des sondes directement marquées par des fluorochromes modifiés.

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"Il faudrait pour le bonheur des états que les philosophes fussent roi ou que les rois fussent philosophes"   Platon