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La cytogénétique et classification des hémopathies malignes

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par Achouria BOURIACH
Universdité d'Oran - Algérie - Diplôme des études supérieures en génétique 2012
  

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II.3.2.3.4 Preparation des cibles :

egiagotertique et laid/ Caton deo détutpatideo tiralipteo

Elle est habituellement identique à la cytogénétique classique : préparation de lames de chromosomes en métaphase ou prométaphase. Des préparations spécifiques particulières sont parfois employées : études en interphase, chromatine étirée, peignage moléculaire de l'ADN, coupes tissulaires...

.oupures : actionvité exonucléasique arqués (dxtp).

; 2004.

11.3.1.3.5 Detection des sondes :

- Détection par immunofluorescence :

Les sondes marquées par des haptènes sont révélées par immunoréaction grâce à des anticorps spécifiques couplés à des fluorochromes. Le montage peut comporter un seul anticorps (immunodétection directe, (

figure 20) ou plusieurs anticorps superposés pour amplifier le signal ( immunodétection indirecte). La difficulté est ici d'obtenir un rapport signal/bruit satisfaisant avec un minimum de bruit de fond (Knezevich et al., 1998).

- Détection directe :

Les sondes étant directement fluorescentes, la détection ne nécessite pas d'amplification du

signal ; son utilisation en est donc plus facile, plus rapide et moins parasitée par le bruit de fond 11.3.2.3.6 Analyse au microscope

~

La FISH nécessite un microscope à épifluorescence équipé de filtres appropriés aux nombreux fluorochromes disponibles : isothiocyanate de fluorescéine (vert-jaune), rouge Texas, rhod amine (rouge), coumarine (bleu), etc.. ). Les molécules émettent une lumière lorsqu'elles sont excitées par une longueur d'onde appropriée. Des filtres sont disponibles avec plusieurs bandes passantes permettant de détecter plusieurs couleurs durant la même observation (figure 22) , F1: double bande passante, figure F2 : triple bande). L'observation de couleurs difficilement perceptibles par l'oeil humain (cyanine, rouge sombre) ou la distinction de combinaisons

nombreuses couleurs (Multi-FISH, figure 22 E) bénéficient indéniablement de l'avantage des caméras numériques de capture couplées au microscope. Il en est de même des logiciels adaptés au traitement de l'image.

11.3.2.3.7 Application clinique :

La cytogénétique moléculaire intéresse tous les domaines de la cytogénétique classique : constitutionnelle : post et prénatale ainsi que récemment le diagnostic préimplantatoire ; analyse des anomalies acquises : onco-hématologie, tumeurs solides (tableau V). Devant les différentes possibilités techniques offertes par la cytogénétique, le prescripteur peut être dérouté dans sa démarche diagnostique : caryotype conventionnel standard ou en haute Résolution, sur fibroblastes, recherche de la fragilité de l'X, FISH avec recherche de microdélétions, association d'une étude en biologie moléculaire, Multi-FISH, étude

Tableau V : Principales indications de la FISH Cytogénétique. (Le diagnostic
préimplantoire n'est pas indiqué dans ce dernier)

M.jeaunepier et al. GENETIQUE MEDICAL ;ISBN2 29400812X ;; 2004.

"pantélomèrique"... sont autant d'analyses disponibles : un minimum de connaissances est nécessaire aux médecins impliqués notamment dans le cadre diagnostique du retard mental. Cette connaissance associée à une réflexion clinique appropriée, permet de prescrire à bon escient en collaboration avec le cytogénéticien les examens adaptés.

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"Je ne pense pas qu'un écrivain puisse avoir de profondes assises s'il n'a pas ressenti avec amertume les injustices de la société ou il vit"   Thomas Lanier dit Tennessie Williams