Détection du myélome par électrophorèse de protéines sériques dans l'ouest algérien

3-Matériel et méthodes

3.1-Les malades

Notre étude a porté sur 16 malades qui ont été hospitalisés dans différents services du CHU d'Oran .

L'étude statistique à porté sur 291 patients (H/F : 127/164) d'un âge moyen de 55 ans atteints d'un myélome durant la période de février 2006 à mars 2010 au niveau de différents services du CHU d'Oran.

3.2- Prélèvement du sang

Les prélèvements sanguins sont realisés après 12 heures de jeûnes par ponction veineuse sur tube sec.

La ponction veineuse permettant un prélèvement de sang est un acte quotidien indispensable pour rechercher une anomalie sanguine. Nous avons réalisé les étapes  suivantes comme l'indique la Figure 4:

· Demander au patient de s'assoir le bras reposant sur une surface dure jamais debout (car risque de malaise).

· Se laver les mains soigneusement et mettre des gants par précaution.

· Chercher la veine du plie du coude la plus visible et la plus palpable, une fois trouvée appliquer le garrot en le serrant modérément environ 10 cm au dessus du point de ponction et ceci pour faire gonfler la veine .

· Désinfecter l'endroit de la ponction veineuse à l'aide d'un coton alcoolisé .

· Tenir l'aiguille avec un ongle de 30°, la faire pénétrer dans la veine .

· Remplir la seringue d'environ 5 ml du sang.

· Desserrer le garrot, faire sortir l'aiguille du point de ponction .

· Mettre le sang prélevé dans un tube a heparine .

· Mettre du coton sec au niveau du point de ponction et demander au patient de plier le bras pour que l'écoulement du sang s'arrête, puis lui mettre du pansement.

Figure 4: Les étapes du prélevements sanguin

3.3 - Centrifugation du sang et obtention du sérum

La centrifugation est une technique qui utilise le principe de la force centrifuge pour séparer les composants du sang.

Le sang des malades est centrifugé à une vitesse de 1200g pendant 15 minutes dans des tubes à centrifugation (Figure 5).

Après centrifugation le surnageant (le sérum) est récupéré dans de nouveaux tubes.

Figure 5: Centrifugation du sang et obtention du sérum.

3.4 - Electrophorèse des protéines sériques

L'électrophorèse des protéines sériques permet la séparation des constituants d'un mélange protéique sous l'action d'un champ électrique. Et de diagnostiquer une production anormale de protéines et de préciser quel type d'immunoglobuline est concerné.

Pour effectuer la technique d'électrophorèse des proteines sériques nous avons réalisé les étapes suivantes (Figure 6) :

· Mettre à tremper le gel d'acétate de cellulose dans le tampon d'électrophorèse (tampon Tris-barbital pH 8,8) pendant 10 à 20 minutes.

· Eliminer l'excès de tampon en plaçant le gel d'acétate de cellulose entre deux feuilles de papier absorbant .

· Remplir les deux compartiments de la cuve avec un même volume de tampon d'électrophorèse.

· Couper deux bandelettes de forme rectangulaire du papier buvard qui sérviront à fixer le gel d'acétate de cellulose et aider la migration du tampon.

· Prélever les échantillons du sérum à l'aide d'un applicateur qui porte huits cavaliers (chaque cavalier correspond à un patient) et les déposer sur le gel.

· Placer le gel d'acétate de cellulose sur le portoir d'appareil d'électrophorèse en veillant à disposer la face absorbante vers le haut.

· Déposer les deux bandelettes préalablement préparées aux extrémités de chaque bande d'acétate de cellulose.

· Fermer la cuve et mettre sous tension (environ 30 mn de migration à 190 V).

· Après migration, le gel est coloré au rouge ponceau pendant 5mn [Le rouge ponceau reconnu pour sa fixation linéaire sur les protéines en fonction de leur concentration. Mais son affinité est différente vis à vis de l'albumine et des globulines (plus faible)], puis lavé et décoloré dans des bains successifs d'acide acétique à 5 % pendant 10 minutes.

· Le gel de cellulose est transparaisse dans une solution: méthanol/acide acétique/diacétone alcool (70/20/10, v/v/v), la transparisation est achevée par un séchage à l'étuve à 80°C pendant 5 mn. Le gel est ensuite lu au densitomètre.

Trempage Essorage

Gel dans la cuve Migration

Coloration en rouge ponceau Décoloration

Figure 6: Les étapes de la technique d'électrophorèse des proteines sériques.