2.3.5.3. Dosage des protéines totales : selon la
fiche technique Spinreact.
a- Principe :
Les ions cuivriques, dans un milieu alcalin, interagissent
avec les liaisons peptidiques des protéines formant un complexe bleu
violet où l`intensité de la couleur est proportionnelle à
la quantité des protéines plasmatiques (33,34).
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs utilisés
:
|
Réactifs
|
Composition
|
Concentration
|
|
R
Biuret
|
Sodium potassium tartrate Sodium iodique Potassium iodique Cuivre
de sulfate
|
15 m mol! L 100 m mol! L 5 m mol! L 19 m mol!L
|
|
Etalon
|
Sérum bovine albumine
|
7 g! dl
|
35
Résultats &
Interprétation
d- Mode opératoire :
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
|
R (ml)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
|
Etalon (ul)
|
-
|
25
|
-
|
|
Echantillon (ul)
|
-
|
-
|
25
|
- Agiter bien les tubes et les incuber 10 min à la
température ambiante.
- Lire l`absorbance (A) de l`échantillon et de
l`étalon contre le blanc à la longueur d`onde 540 nm.
e- Calcul :
[Protéines totales] (g/dl) = x 7
(concentration de l`étalon)
2.3.5.4. Dosage des lipides totaux : selon la fiche
technique Spinreact
a- Principe :
Les lipides totaux forment avec le phosphovainilline et en
présence de l`acide sulfurique un complexe coloré,
l`intensité de sa couleur est proportionnelle à la concentration
des lipides totaux dans les échantillons (35,36).
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs utilisés
:
Réactifs
|
Composition
|
Concentration
|
R
|
Phosphovainilline
|
235 m mol/ L
|
Etalon
|
Lipides totaux
|
750 mg/ dl
|
Réactif optionnel
|
Acide sulfurique
|
80%
|
|
d- Mode opératoire :
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
|
H2SO4 (ml)
|
2,5
|
2,5
|
2,5
|
|
Etalon (ul)
|
-
|
100
|
-
|
|
Echantillon (ul)
|
-
|
-
|
100
|
-Mélanger bien et incuber les tubes à essai pendant
10 min dans un bain marie à 100 °C.
36
Résultats &
Interprétation
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
|
H2SO4 (ml)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
|
Etalon (ul)
|
-
|
-
|
50
|
|
Echantillon (ul)
|
-
|
50
|
-
|
-Lire l`absorbance (A) des échantillons à 520 nm
après une incubation pendant 15 min à 37°C.
e- Calcul :
[Lipides totaux] (mg/dl) = x 750
2.3.5.5. Dosage de
cholestérol : selon la fiche technique Spinreact
a- Principe :
Le cholestérol présent dans l`échantillon
forme un complexe coloré selon les réactions suivantes (115,116)
:
Cholestérol ester + H2O Cholestérol
Cholestérol + Acides gras
estérase
Cholestérol
Cholestérol + O2 - Cholésténone +
H2O2
oxydase
2H2O2 + Phénol + 4- Aminophénazone Quinoneimine + 4
H2O
POD
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs utilisés
:
|
Réactifs
|
Composition
|
Concentration
|
|
R1
Tampon
|
PIPES pH 6,9
Phénol
|
90 m mol/ L 26 m mol /L
|
|
R2
Enzymes
|
Cholestérol estérase (CHE) Cholestérol
oxydase (CHOD) Peroxydase (POD)
4- Aminophénazone (4- AP)
|
300 U/L 300 U/L 1250 U/L 0,4 m mol/ L
|
|
Etalon
|
Cholestérol
|
200 mg/ dl
|
37
Résultats &
Interprétation
? Préparation du réactif de travail
(RT) :
- Dissoudre le contenu du réactif R2 dans la fiole du
réactif R1.
- Mélanger bien et doucement jusqu`à la dissolution
complète. Ce réactif est stable 4 mois à 2-8°C ou 40
jours à 15-25°C.
d- Mode opératoire :
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
RT (ml)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
Etalon (ul)
|
-
|
10
|
-
|
Echantillon (ul)
|
-
|
-
|
10
|
|
-Mélanger et incuber les tubes pendant 10 min à la
température ambiante.
-Lire l`absorbance (A) de l`échantillon et de
l`étalon à 505 nm contre le blanc, la couleur est stable pendant
une heure.
e- Calcul :
[Cholestérol] (mg/dl) = x 200
(concentration de l`étalon).
| 
