2.3.5.6. Dosage de la phosphatase alcaline (PAL) : selon la
fiche technique Spinreact.
a- Principe :
L`activité enzymatique de la PAL et
déterminée selon la réaction suivante (37,38) :
P- Nitrophénylphosphate + H2O PAL
P-Nitrophénol+ phosphate
pH 10,4
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs
utilisés
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Réactifs
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Composition
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Concentration
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R1
Tampon
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-Diethanolamine (DEA) pH 10,4 -Chlorite du magnésium
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1 m mol ! L 0,5 m mol! L
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R2
Substrat
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P-Nitrophénylphosphate (pNPP)
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10 m mol!L
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38
Résultats &
Interprétation
? Préparation du réactif de travail
(RT) :
- Dissoudre un comprimé du R2 dans une fiole du R1.
- Mélanger doucement jusqu'à la dissolution
complète. Ce réactif est stable pendant 21 jours à
2-8°C ou 5 jours à la température ambiante.
d- Mode opératoire :
Réactif de travail (ml)
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1,2
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Echantillon (ul)
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50
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- Mélanger et incuber les tubes pendant 1 min.
- Lire l`absorbance initiale (A) des échantillons
à 405 nm avec trois répétitions (chaque 1 minute
d`incubation).
e- Calcul :
Activité PAL (U/L) = ÄA/ min x
3300
ÄA/ min : la valeur moyenne des trois lectures par
minute.
2.3.5.7. Dosage de TGO : selon la fiche technique
spinréact
a-Principe :
L`aspartate aminotransférase (AST) appelée aussi
L'oxaloacétate de glutamate (GOT) catalyse le transfert
réversible d'un groupe aminé à partir de l'aspartate au
á-cétoglutarate formant le glutamate et l'oxaloacétate.
L'oxaloacétate est réduit au malate par la malate
déshydrogénase (MDH) et le NADH,H+ (39,40):
AST
Aspartate + á-cétoglutarate glutamate +
oxaloacétate
MDH
Oxaloacétate + NADH+H+ malate +
NAD+
39
Résultats &
Interprétation
b-Echantillon : Plasma. c-Réactif
utilisés :
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Réactifs
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Composition
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Concentration
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R1
Tampon
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-Tris pH 7.8 -L- Aspartate
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80 mmol/L 200 mmol/L
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R2
Substrat
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-NADH
-Lactate déhydrogenase (LDH) -Malate déhydrogenase
(MDH) -á-cétoglutarate
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0.18 mmol/L 800 U/L
600 U/L
12 mmol/L
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? Préparation du réactif :
Dissoudre un comprimé de R2 dans un flacon de R1. Ce
réactif est stable 21 jours à 2-8°C ou 72 heures à
15-25°C.
d-Mode opératoire :
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Réactif de travail (ml)
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1.0
|
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Echantillon (ul)
|
100
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Mélanger, incuber pendant une minute. Lire à 340
l`absorbance (A) initiale et démarrer le
chronomètre simultanément. Lire à nouveau
après 1, 2 et 3 minutes.
e-Calcul :
La concentration de TGO est calculée par la formule
suivante :
Activité TGO (U/L) = ÄA/min X
1750
ÄA/ min : la valeur moyenne des trois lectures par
minute.
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