I-4 Origine des champignons utilisés
Trois souches de champignons ont été
procurées de l'unité service de maintenance des souches du Centre
de Biotechnologie de Sfax (CBS) à partir de la Collection Tunisienne des
Microorganismes (CTM). Ces souches sont de références suivantes :
CTM 10099 (Aspergillus niger), CTM 10156 (Trametes trogii),
CTM 10476 (Trichoderma atroviride).
I-5 Milieux de culture
I-5-1 Milieu liquide à base de son de blé pour
la production de â-glucosidase à partir d'une fermentation en
erlenmeyer
Ce milieu de culture est constitué de 67 g de son de
blé supplémenté de 1 g/l KH2PO4, 2,5 g/l K2HPO4 ; 0,3 g/l
MgSO4·7H2O ; 0,3 g/l CaCl2 ; 3,75 g/l urée ; 3,75 g/l peptone de
blé ; 1 g/l extrait de levure ; 1 ml/l Tween 80 et 1ml/l
oligoéléments. Le pH est ajusté à 4 par l'addition
de HCl (2 M). Ce milieu est par la suite stérilisé par
autoclavage (20 min, 121°C).
I-5-2 Milieu liquide à base de son de blé pour
la préculture d'A. niger
Un fermenteur de volume total de 20 litres (Biolafitte) a
été utilisé pour préparer une préculture
d'A. niger. Le volume utile préparé est de 7 litres est
constitué de 469 g de son de blé supplémenté de 7 g
KH2PO4, 17,5 g K2HPO4 ; 2,1 g MgSO4·7H2O ; 2,1 g CaCl2 ; 52,5 g
urée ; 7 g extrait de levure ; 7 ml Tween 80 et 7 ml
oligoéléments. Le pH est ajusté à 4 par l'addition
de HCl (2 M). Ce milieu est par la suite stérilisé par chauffage
du contenue à 121°C
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Matériel et Méthodes
durant 20 minutes. Un prétraitement du son de
blé a été effectué en l'hydrolysant partiellement
par son chauffage jusqu'à ébulition durant 10 minutes et en
ajustant son pH à 3. L'hydrolysat est filtré afin
d'éliminer les macromolécules, par la suite, le filtrat est
additionné au fermenteur. Cette étape supplémentaire
d'hydrolyse du son de blé est effectué afin d'éviter
l'appartiton abondante de mousse et/ou le colmatage des tyaux du fermenteur.
I-5-3 Milieu liquide à base de son de blé pour
la fermentation d'A. niger pour la production de
â-glucosidase
Un fermenteur de volume total de 100 litres (Biotron) a
été utilisé pour préparer une culture d'A.
niger. Le volume utile préparé est de 40 litres est
constitué de 2680 g de son de blé préalablement
hydrolysé supplémenté de 40 g KH2PO4, 100 g K2HPO4 ; 12 g
MgSO4·7H2O ; 12 g CaCl2 ; 300 g urée ; 40 g extrait de levure ; 40
ml Tween 80 et 40 ml oligoéléments. Le pH est ajusté
à 4 par l'addition de HCl (2 M). Ce milieu est par la suite
stérilisé par chauffage du contenue à 121°C durant 20
minutes.
I-5-4 Milieu solide ME pour le repiquage et la conservation des
champignons
A court et à moyen terme les champignons sont
conservés et repiqués sur le milieu solide ME. La composition de
ce milieu est la suivante : extrait de malt 20 g/l, agar-agar 20 g/l. Le pH de
ce milieu est réglé à 5,5.
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