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Antibiorésistance des entérobacteries productrices de b-lactamases à  spectre étendu isolées de l'hôpital de Sétif (Algérie): détermination des gènes par PCR-multiplex


par Khalil Abdallah REFOUFI
Université Ferat Abbas de Setif - Master en Biologie spécialité Microbiologie Appliquée 2016
  

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CHAPITRE 1 : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

1-Les entérobactéries 3

1-1-Définition 3

1-2-Classification 3

1-3-Caractères bactériologiques 3

1-4-Caractères biochimiques 4

1-5-Caractères antigéniques 4

1-6-Pouvoir Pathogène 4

2-Les f3-lactamines 7

2-1-Classification des f3-lactamines 7

2-1-1-Les pénicillines (noyau péname) 8

2-1-2-Les céphalosporines (noyau céphème) 8

2-1-3-Les pénèmes (Carbapénèmes) 10

2-1-4-Les monobactames 10

2-1-5-Les inhibiteurs des f3-lactamases 10

2-2-Mode d'action des f3-lactamines 12

3-Résistance des entérobactéries aux f3-lactamines 12

3-1-Types de résistance 12

3-1-1-La résistance naturelle 13

3-1-2-La résistance acquise 13

3-2-Supports génétiques de la résistance 14

3-2-1-Le chromosome 14

3-2-2-Les éléments génétiques mobiles 14

a) Plasmides 15

b) Séquences d'insertion et transposons 16

c) Les intégrons 16

3-3-Mécanismes de résistance aux f3-lactamines 17

3-3-1-Diminution de la perméabilité 17

3-3-2-Modification de la cible 17

3-3-3-Hyperproduction du système d'efflux 17

3-3-4-Production d'enzymes 18

4-Les f3-lactamases 18

4-1-Classification des f3-lactamases 19

4-1-1-Classification d'Ambler 19

4-1-2-Classification de Bush-Jacoby-Medeiros 20

5-Les f3-lactamases à spectre élargi BLSE 22

5-1-Différents types de BLSE 22

5-1-1-BLSE de type TEM (Temoneira - nom du patient) 22

5-1-2-BLSE de type SHV : (Sulfhydryl variable) 24

5-1-3-BLSE de type CTX-M (Cefotaximase-Munich) 25

5-1-4-Autres types de BLSE 25

5-1-5-Les Carbapénèmases 26

a)Classification des carbapénèmases 26

6-Epidémiologie mondiale des entérobactéries BLSE 29

6-1-Les BLSE classiques 29

6-1-1-En Europe 29

6-1-2-En Afrique 29

6-1-3-En Asie 30

6-1-4-En Amérique 31

6-2-Les BLSE de type carbapénèmases 32

7-Facteurs de risque d'acquérir une BLSE 33

CHAPITRE 2 : MATERIEL ET METHODES

1-Prélèvement et identification 34

1-1-La mini galerie (galerie classique) 34

1-2-La galerie Api 20E 35

1-3-Le systeme MicroScan WalkAways SIEMENS 35

2-Antibiogramme 36

3-Détection phénotypique des EBLSE 37

3-1-Test de synergie 38

3-2-Test du double disque 38

3-3-Test à la cloxacilline 39

4-Détection génotypique des EBLSE 40

4-1-Extraction d'ADN plasmidique par la lyse alcaline 40

a) Extraction d'ADN 40

b) Extraction de l'ADN chromosomique par Boiling 41

4-2-Amplification par PCR (Polymerase Chain Reaction) 41

4-2-1-Principe 41

4-3-Electrophorèse sur gel d'agarose 43

CHAPITRE 3 : RESULTATS ET DISCUSSION

Résultats 44

1-Entérobactéries 44

1-1-Répartition des entérobactéries par espèces 44

1-2-Répartition des entérobactéries selon l'origine de l'infection 45

1-3-Pourcentage des entérobactéries selon le sexe 45

1-4-Répartition des entérobactéries selon les tranches d'âge 46

1-5-Profil de résistance des entérobactéries aux antibiotiques 47

1-6-Profil de résistance des entérobactéries aux antibiotiques par année 47

a) Résistance aux f3-lactamines 47

b) Résistance aux autres antibiotiques 48

2-Les EBLSE 49

2-1-Fréquence d'isolement des EBLSE 49

2-2-Répartition des EBLSE selon l'espèce 50

2-3-Répartition des EBLSE selon l'origine de l'infection 50

2-4-Répartition des EBLSE selon le service 51

2-5-Répartition des EBLSE selon la nature du prélèvement 52

2-6-Répartition des EBLSE selon le sexe 52

2-7-Profil de résistance des EBLSE 53

2-7-1-Résistance aux f3-lactamines 53

2-7-2-Résistance aux aminosides 54

2-7-3-Résistance aux quinolones 54

2-7-4-Résistance aux autres antibiotiques 54

3-Support génétique de la résistance 55

4-Caractérisation des BLSE par la PCR-multiplex 58

4-1-BLSE de type CTX-M 58

4-2-BLSE de type SHV 60

4-3-BLSE de type TEM 60

4-4-Résistances multiples 60

Discussion 63

Conclusions et Perspectives 69

Références bibliographique 72

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"Entre deux mots il faut choisir le moindre"   Paul Valery