III-3 TEST DE LA SPECIFICITE DE LA MESURE
III-3-1 Matériel et méthode
Le matériel utilisé est le même , mais les
modifications suivantes ont étés faites :
- Tissu : 55 mg de muscle gastrocnémien sont broyés
dans 1 mL de Tp de broyage, pH 7,4.
- 900 1iL de surnageant + 81iL éthanol 95% ( incubation
30mn à 4°C) + 81iL TRITON X 100 à 1% ( incubation 10 mn
à 4°C).
- 450 1iL de surnageant sont dénaturés
par chauffage au bain marie, à 90°C pendant 15mn et le
reste, soit 4501iL( surnageant natif) sont utilisés pour la mesure de la
DO à 240 nm.
III-3-2 Mesure de la DO à 240 nm.
Au départ 2 cuves sont remplies chacune de 900uL de MR
et de 50uL de surnageant. Ces 2 cuves permettent de faire l'autozero du
spectrophotomètre. Un tube servira de blanc et 300 uL de MR seront
ajoutés à ce tube .
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Solution
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Blanc
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Echantillon
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MR (uL)
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1200
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900
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Surnageant (uL)
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50
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50
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H2O2 à 1/200(uL)
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0
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300
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III-3-3 Résultats :
N = 10
ADO/min
0,04
0,03
0,03
0,02
0,02
0,01
0,01
0,00
N = 5
Contrôle 15min, 90°C
Figure 4 : Mesure
spectrophotométrique de la dégradation de H2O2 par un
surnageant natif ou un surnageant inactivé par incubation 15 min
à 90°C.
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