II.18.1- Dosage
La méthode de désoxyribose adoptée dans
cette étude :
Le mélange réactionnel contient les
réactifs suivants : 0,4 ml de la solution tampon phosphate
(50 mmol/ l, pH 7.4), 0,1 ml de l'extrait à
différentes concentrations, 0,1 ml de l'EDTA (1.04 mmol/l), 0,1 ml de
FeCl (1 mmol/l) et 0,1 ml de 2-désoxyribose (60 mmol/l). La
réaction est commencée par l'addition de 0.1 ml de l'acide
ascorbique (2 mmol/l) et 0.1 ml de H2O2 (10 mmol/l). Après
l'incubation à 37C° pendant 1 heure, 1 ml de l'acide
thiobarbutirique (TBA) (10g/l) est ajouté dans le milieu
réactionnel suivi par 1 ml de l'acide chlorhydrique (HCl) (25%). Les
mélanges sont placés au bain marie à 100C°
pendant 15 min puis sont refroidits avec de l'eau. L'absorbance des solutions
est mesurée à 532 nm avec le spectrophotomètre contre le
blanc. La capacité du piégeage du radical hydroxyle est
évaluée comme le pourcentage d'inhibition de l'oxydation de
2-désoxyribose par les radicaux hydroxyles (HALLIWELL et al.,
1987).
Le pourcentage du piégeage est calculé en basant
sur la formule suivante :
Pourcentage de piégeage (%) = [A0 - (A1-A2)]
×100/A0
A0 : l'absorbance du contrôle sans extrait.
A1 : l'absorbance après l'addition de l'extrait et de
désoxyribose.
A2 : l'absorbance de l'extrait sans désoxyribose.
Le contrôle positif utilisé est celui du BHA
(HALLIWELL et al., 1987).
II.19- Peroxydation de l'acide linoléique
II.19.1- Principe
L'activité antioxydant des extraits de plantes est
mesurée par l'inhibition de la peroxydation de l'acide linoléique
en utilisant la méthode au thiocyanate ferrique, selon la méthode
décrite par TAKAO et al. (1994) (BIDIE et al.,
2011).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.19.2- Dosage
Premièrement, une émulsion de l'acide
linoléique est préparée en mélangeant 0,028 g
d'acide linoléique, 0,028 g de Tween 20 et 10 ml de solution tampon
phosphate (0,04 M, pH 7.0). Le milieu réactionnel contient 600 ul de
solutions d'extraits ou de l'antioxydant standard (BHT) à une
concentration bien définie (50ug/ml) et 600 ul de l'émulsion de
l'acide linoléique. Le contrôle négatif contient tous les
réactifs sauf l'échantillon à tester (extraits ou
antioxydant standard) qui est remplacé par un volume égal de la
solution tampon. Après agitation, le mélange est incubé
à 25C° à l'obscurité. La lecture est faite
après 15 min d'incubation puis chaque 24 heures pendant 96 heures, en
mélangeant 1ml d'éthanol, 20 ul KCN, 20 ul d'échantillon
et 20 ul de FeCl2 et après 3min, l'absorbance est lue à 500 nm
contre un blanc d'éthanol (GULCIN, 2005).
Le pourcentage d'inhibition de la peroxydation lipidique est
calculé selon l'équation suivante:
% d'inhibition de peroxydation = [(Ac - At)/ Ac] x100
Ac: absorbance du contrôle.
At: Absorbance du test (BENBRINIS, 2012).
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