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Méthodes d'études d'activité des antioxydants des plantes médicinales

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par Ouafa MEDJOUJDA
Université d'Agadir  - Licence 2012
  

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II.16- Capacité antioxydant totale (TAC)

II.16.1- Principe

La capacité antioxydant totale (TAC) des extraits des plantes est évaluée par la méthode de Phosphomolybdène. Cette technique est basée sur la réduction de molybdène Mo (VI) présent sous la forme d'ions molybdate MoO42- à molybdène Mo (V) MoO2+ en présence de l'extrait pour former un complexe vert de phosphate/ Mo(V) à pH acide (PRIETO et al.,1999).

II.16.2- Dosage

Un volume de 0.3 ml de chaque extrait méthanolique est mélangé avec 3 ml de solution du réactif (0.6 M acide sulfurique, 28 mM de phosphate de sodium et 4 mM de molybdate d'ammonium). Les tubes sont vissés et incubés à 95C° pendant 90 min. Après refroidissement, l'absorbance des solutions est mesurée à 695 nm contre le blanc qui contient 3 ml de la solution du réactif et 0.3 ml du méthanol et il est incubé dans les mêmes conditions que l'échantillon. La capacité antioxydant totale est exprimée en milligramme équivalents d'acide ascorbique par gramme de la matière sèche (mg EAA/ g MS) (PRIETO et al., 1999).

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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des antioxydants des plantes médicinales

II.17- Procédé de puissance de réduction (RP)

II.17.1- Principe

Cette méthode est basée sur le principe d'augmentation de l'absorbance des mélanges réactionnels. L'augmentation de l'absorbance indique une augmentation de l'activité antioxydant. Dans ce procédé, l'antioxydant forme un complexe coloré avec ferricyanure de potassium, l'acide acétique et le chlorure ferrique trichloro, l'absorbance du complexe est mesurée à 700 nm. L'augmentation de l'absorbance de mélange réactionnel indique le pouvoir réducteur des échantillons (JAYAPRAKASH et al., 2001).

II.17.2- Dosage

Dans la méthode décrite par OYAIZU (1986), 2,5 ml du tampon phosphate de 0,2 M (pH 6,6) et 2,5 ml de K3Fe (CN)6 (1 % massa/volume) sont ajoutés à 1,0 ml d'échantillon dissous dans de l'eau distillée. Le mélange résultant est incube à 50C° pendant 20 min, suivi par l'addition de 2,5 ml d'acide acétique trichloro (10 % massa/volume). Le mélange est centrifugé à 3000 rpm pendant 10 minutes. La couche supérieure de la solution (2,5 ml) est mélangée avec l'eau distillée (2,5 ml) et 0,5 ml de FeCl3 (0,1 % massa/volume). L'absorbance est alors mesurée à 700 nm contre le blanc (NUR ALAM et al., 2012).

II.18- Piégeage du radical hydroxyle

Le radical hydroxyle (OH°) est un radical libre extrêmement réactif formé dans les systèmes biologiques à partir d'anion superoxyde et le peroxyde d'hydrogène en présence des ions métalliques comme le fer et le cuivre suivant la réaction de HABER WEISS (CASTRO et FREEMAN, 2001). Ce radical possède un électron libre avec un potentiel de réduction plus élevé (2310 mV) lui permet de réagir avec les lipides, les protéines les polypeptides et l'ADN particulièrement la thiamine et la guanine (SIDDHURAJU et BECKER, 2007).

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"Je ne pense pas qu'un écrivain puisse avoir de profondes assises s'il n'a pas ressenti avec amertume les injustices de la société ou il vit"   Thomas Lanier dit Tennessie Williams