Chapitre 2 : MATERIELS ET METHODES
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2.1. Matériels.
Le suivi des expériences s'est déroulé dans
un laboratoire dont les conditions atmosphériques
sont propices à la vie des glossines. La
température interne du laboratoire était de 25#177;1°c et
l'humidité de 70%. Ces conditions sont réalisées
grâce à des climatiseurs fonctionnant 24/24h et des
humidificateurs automatiques fixés sur le bâtiment et
réglés à 70%.
Le matériel d'expérience se compose de
matériel biologique et de matériel technique
2.1.1. Matériel biologique.
.
a. Les glossines
Trois espèces de glossines ont fait l'objet d'un suivi.
Il s'agit de Glossina tachinoides, de G.
palpalis gambiensis et de G. morsitans
submorsistans. G. palpalis et G. tachinoides
appartiennent au sous genre Nemorhina. G. morsitans
submorsistans quant à elle appartient au sous genre Glossina
str. Ces trois espèces sont élevées dans
l'insectarium du CIRDES.
En rappel, Glossina gambiensis palpalis et G.
morsitans sont originaires du Burkina Faso. G. tachinoides quant
à elle vient du Tchad. Les pupes de G. palpalis gambiensis
furent récoltées dans la forêt classée de la
marre aux hippopotames à Satiri et de la forêt classée de
la Guinguette au bord du fleuve Kou. Après être envoyé au
laboratoire d'entomologie de maison-Alfort en France pour une analyse, 10 024
pupes étaient admises à Bobo Dioulasso de ce dernier le
25/03/1975, pour le démarrage de l'élevage. En 1979, les pupes de
G. tachinoides arrivaient du Tchad au CIRDES ex CRTA. Les pupes de
G. morsitans submorsitans enfin, furent récoltées dans
la région de Samorougouan dans les années 19801981.
Après une alimentation « in vivo» sur des
animaux (chèvres, cobayes et lapins) en 1979 fut introduit le mode de
l'alimentation sur membrane artificielle (Bauer et Politzar, 1982 Kam, 2003).
Dès lors, on aboutit à une alimentation mixte et ce, jusqu'en
1984. Actuellement, les glossines sont exclusivement nourries sur membrane de
silicone très mince (400-600um) recouvrant du sang.
b. Le sang.
Deux types de sang sont utilisés. IL s'agit du sang frais
et du sang congelé.
- Le sang frais.
Il est récolté les lundis et jeudis à 1
heure du matin à l'abattoir frigorifique de Bobo-
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Dioulasso. Il est immédiatement defibriné. Ce
sang est ensuite conditionné dans des flacons de 0,5l après un
ajout d'ATP (700mg/l) et de glucose (1000mg/l). Les flacons de sang sont
après irradiés au rayon gamma par du césium 137 à
la dose de 50 krad (0,5 krad / mn pendant 1h 40 mns). L'utilisation du sang
n'intervient que 24 h après un contrôle bactériologique. Il
est conservé au réfrigérateur à 4°c. et n'est
pas utilisé au-delà d'une semaine
- Sang congelé.
Une partie du sang frais récolté est
conditionnée dans des flacons en plastique et conservée dans un
congélateur fonctionnant à -12°c. Pour être
utilisé, ce sang doit être décongelé.
Deux méthodes ont été utilisées
pour la décongélation du sang. La première consiste
à placer deux flacons dans un réfrigérateur fonctionnant
à 4°c pendant 24h. Au bout de ce temps, le sang est
décongelé et prêt à la préparation. Quant
à la deuxième, il suffit de plonger deux flacons dans de l'eau de
robinet pendant quelques heures. Cette deuxième méthode a
l'avantage de provoquer une décongélation rapide mais
présente des inconvénient sur la qualité du sang, La
première qui demande plus de temps est la meilleure.
La préparation est idem à celle du sang frais
à la différence qu'un des flacons de sang est irradié sans
ajout d'ATP ni de glucose. L'irradiation est faite pendant 1h45mn (105 minutes)
à la dose de 52,5 krad. Chaque flacon est utilisé pendant trois
jours.
2.1.2. Matériel technique. a. Les cages de
contention.
Plusieurs cages sont utilisées pour le conditionnement
des mouches. Ce sont :
- Les grandes cages. Ce sont des cages
parallélépipédiques en fil d'acier inoxydable de 3 mm de
diamètre. Ces cages de dimensions 6 cm X 39 cm X 19 cm sont
habillées de tulles moustiquaires dont le diamètre des mailles
est fonction de l'espèce. Celles des cages de Glossina morsistans
et G. palpalis ont un diamètre 2 mm X 2 mm alors que celle de
G. tachinoides est de 2 mm X 1 mm. Cependant une des faces
latérales porte une bande de tulle dont les mailles sont de 2 mm X 2 mm
afin de laisser passer les larves. Les tulles débordent à l'une
des extrémités formant un manchon que l'on noue avec un lacet
après l'introduction des glossines. Une grande cage peut supporter 150
femelles et 50 mâles.
- Les cages TPU-3,
Ce sont des cages cylindriques en polychlorure de Vinyle
(P.V.C) de 19 cm de diamètre et de hauteur 5 cm. Les deux faces
latérales sont ouvertes et recouvertes de tulles moustiquaires
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dont les mailles sont suffisamment grandes pour laisser passer
les pupes (2 mm X 2 mm). Les deux tulles, solidairement fixés par des
élastiques sont liés l'un à l'autre par
l'intermédiaire de pinces. La face fermée par une plaque est
percée d'un trou par lequel on introduit ou prélève les
mouches, Elles ont un volume de 1417,64 cm3.
- Cages Roubaud,
Ce sont de cages parallélépipédiques de
dimensions 13 cm X 8 cm X 4,5 m. Elles sont habillées de tulles
moustiquaire de mailles de diamètre 1 mm X1 mm. Elles débordent
d'une extrémité par laquelle on les noue à l'aide d'un
lacet. Chaque cage Roubaud peut contenir 150 males et 50 femelles.
- Les cages individuelles,
Ce sont de petites cages cylindriques de 6cm de
diamètre et de 2.7cm de hauteur faites de PVC. Elles présentent
l'avantage de permettre la détermination facile du poids ou de la
quantité de sang ingéré par les glossines.
- Les plaques chauffantes,
L'alimentation des mouches se fait au moyen de plaques
chauffantes à l'abri de toute lumière. Sur ces plaques sont
déposées support et membranes en silicone et entre lesquelles est
étalé du sang. Elles servent à chauffer le sang à
une température avoisinant celle de l'organisme (37°c). Ces plaques
fonctionnent à 41°c et sont placées dans une enceinte
où les conditions sont optimums (température 25°c,
humidité 70%).
- Les cages d'éclosion.
b. Autres matériels,
Plusieurs autres matériels sont utilisés. Ce
sont:
- les chariots sur lesquels sont déposées les cages
;
- les étuves fonctionnant à 105°c et servant
à stériliser le matériel de manipulation,
après utilisation,
- les pondoirs individuels en aluminium permettant la
récolte des pupes par cage. Il
est fait de deux plans inclinés entraînant les
larves à un collecteur central,
- des tubes à essais pour l'accouplement des glossines
;
- des congélateurs pour l'anesthésie des glossines
afin de pouvoir les repartir par
sexes dans les cages;
- une balance pour la prise de la masse des mouches et celle des
pupes ;
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- un microscope et une binoculaire pour la dissection ;
- des boites de pétries;
- une trousse de dissection ;
- du papier pour les étiquettes.
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