1.2 La méthode du nombre le plus probable
(NPP)
Le Nombre le Plus Probable (NPP) est une estimation
statistique de la densité des microorganismes et des intervalles de
confiance sont attachés à cette estimation moyenne.
Selon le centre d'expertise en analyse environnementale
(Quebec) de la revue MA. 700- Ecct du 30 Avril 2003, le principe de la
méthode NPP (NPP signifie nombre le plus probable) consiste à
ensemencer de nombreux volumes ou des dilutions d'un même
échantillon dans des tubes de bouillon d'enrichissement et par la suite
à confirmer la présence de salmonelles par repiquage des tubes
sur gélose sélective.
Chacune des géloses sélectives positives
correspond à un tube d'enrichissement particulier. Le nombre le plus
probable de salmonelles peut alors être estimé dans une
quantité spécifiée d'échantillon à partir du
nombre et de la répartition des tubes positifs.
Elle s'applique aux résidus des fabriques de
pâtes et papiers, aux composts domestiques ainsi qu'à toutes les
matrices solides ou liquides. Cette méthode peut être
utilisée également comme test présence-absence dans le cas
où seulement la présence de salmonella est requise.
Les résultats sont exprimés avec un intervalle
de confiance (95%).
1.2.1 Quantification des Escherichia coli dans les eaux (NF
CEN ISO 9308-3 de mars 1999)
Cette méthode miniaturisée pour ensemencement en
milieu liquide (Nombre le Plus Probable) vise à quantifier les
Escherichia coli dans les eaux de surface et les eaux résiduaires.
L'échantillon à analyser est dilué puis
ensemencé dans une série de puits d'une microplaque contenant le
milieu de culture déshydraté et les dilutions sont
adaptées au niveau de contamination supposé de l'eau
prélevée. Les microplaques sont examinées sous rayonnement
ultraviolet à 366 nm dans l'obscurité après une
période d'incubation de 36 h minimum et 72 h maximum à 44°C
#177; 0.5°C. La présence d'Escherichia coli est indiquée par
une fluorescence bleue résultant de l'hydrolyse du
4-Méthylumbelliféryl-b-D-glucuronide (MUG) par une enzyme
(b-D-glucuronidase) présente chez cette bactérie
entérique.
Le Nombre le Plus Probable (NPP) est une estimation
statistique de la densité des microorganismes et des intervalles de
confiance sont attachés à cette estimation moyenne.
Exemple de calcul :
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Dilution
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Nombre de tubes positifs
|
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1/2
|
24 sur 24
|
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1/20
|
18 sur 24
|
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1/200
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05 sur 24
|
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1/2000
|
01sur 24m/24
|
Le nombre caractéristique retenu pour
l'évaluation de la contamination colimétrique sera 18 - 5 - 1.
Avec ce nombre caractéristique, on se réfère à la
table de Mac Grady qui définit, pour chaque nombre
caractéristique, un indice correspondant à la quantité
moyenne de bactéries contenue dans chaque tube de la série la
plus concentrée. le nombre probable d'E. Coli dans 100 ml de
l'échantillon analysé est obtenu ensuite en tenant compte de la
quantité de la suspension mère ensemencée et de la
dilution opérée (18.5.1 = 15908 E. coli/100 ml).
Figure 2 : Schéma de la
méthode du nombre le plus probable
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