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UNIVERSITÉ DE
NGAOUNDÉRÉ
*********
ÉCOLE DES SCIENCES ET
DE
MÉDECINE
VÉTÉRINAIRE
*********
DÉPARTEMENT DE PHYSIOLOGIE
ET
BIOTECHNOLOGIES DE LA
REPRODUCTION
THE UNIVERSITY OF NGAOUNDERE
*********
SCHOOL OF
VETERINARY MEDICINE
AND SCIENCES
*********
DEPARTMENT OF
REPRODUCTIVE
PHYSIOLOGY AND
BIOTECHNOLOGY
ÉVALUATION DU POTENTIEL OVARIEN DES
ZÉBUS
POUR LA PRODUCTION IN VITRO
D'OVOCYTES
FÉCONDABLES DANS LE PLATEAU DE L'ADAMAOUA
MÉMOIRE PRESÉNTÉ EN VUE DE
L'OBTENTION DU DIPLÔME DE
DOCTEUR EN MÉDECINE
VÉTÉRINAIRE
Par
DAWAYE SOULEY MONGLO
Matricule :
07A010MV
Première promotion
Encadreur Superviseur
Dr KOUAMO Justin ZOLI PAGNAH André
Chargé de cours Professeur
Année
2014
FICHE DE CERTIFICATION DE L'ORIGINALITE DU
TRAVAIL
Je soussigné DAWAYE SOULEY MONGLO
atteste que le présent mémoire est le fruit de mes
propres travaux effectués à l'abattoir municipal de
Ngaoundéré et au laboratoire de l'IRAD-WAKWA, sous l'encadrement
du Dr KOUAMO Justin et la supervision du Pr ZOLI PAGNAH André.
Ce mémoire est authentique et n'a pas été
antérieurement présenté pour l'acquisition de quelque
grade universitaire que ce soit.
DAWAYE SOULEY MONGLO
Date
Visa de l'encadreur visa du superviseur
Date Date
Visa du Chef du département
Date
II
FICHE DE CERTIFICATION DES CORRECTIONS
APRES
SOUTENANCE
Le présent mémoire a été revu et
corrigé conformément aux observations
du jury.
Visa du superviseur
Date
Visa du président du
jury
Date
Visa du Chef du département
Date
III
DÉDICACE
À
BOUBA MONGLO
iv
REMERCIEMENTS
Au Directeur de l'Ecole des Sciences et de Médecine
Vétérinaire (ESMV), le
Professeur ZOLI PAGNAH André, qui n'a ménagé
aucun effort pour la réussite de notre
formation et pour avoir accepté de superviser ce
mémoire.
Au Docteur KOUAMO Justin qui a encadré ce travail. Il a
porté un intérêt particulier
et a suivi de près toutes les étapes de
réalisation de ce travail.
A tout le personnel enseignant et administratif de l'ESMV.
Au chef du centre de l'IRAD pour nous avoir accordé le
laboratoire.
Au Dr MANCHANG, Dr Germanus BAH du laboratoire de l'IRAD et au
personnel de
l'abattoir municipal de Ngaoundéré pour leur
soutien et leur collaboration.
A mon père MONGLO Silas, ma mère ASTA Elisabeth,
mon oncle
VONDOU MASSAYE Pierre et à tous mes frères et
soeurs. Que Dieu leur accorde longue vie.
A tous mes camarades de la première promotion.
V
TABLE DES MATIÈRES
Page
FICHE DE CERTIFICATION DE L'ORIGINALITE DU TRAVAIL i
FICHE DE CERTIFICATION DES CORRECTIONS APRES SOUTENANCE ii
DÉDICACE iii
REMERCIEMENTS iv
LISTE DES TABLEAUX xi
LISTE DES FIGURES xii
LISTE DES PHOTOS xiii
LISTE DES ABRÉVIATIONS xiv
RÉSUMÉ xv
ABSTRACT xvi
INTRODUCTION 1
CHAPITRE I : REVUE DE LA LITTÉRATURE 3
A. ANATOMIE ET PHYSIOLOGIE DE L'OVAIRE 3
I. Anatomie de l'ovaire 3
I.1. Morphologie 3
I.2. Topographie 4
I.3. Structure histologique 4
I.4. Irrigation et innervation 5
II. Physiologie de l'ovaire 5
II.1. Ovogenèse 5
vi
II.2. Cycle sexuel 6
II.2.1. Evénement cellulaire ovarien 6
II.2.1.1. Folliculogenèse 6
II.2.1.1.1. Aspects morphologiques du développement
folliculaire 7
II.2.1.1.2. Dynamique de la croissance folliculaire 10
II.2.1.1.3. Régulation de la croissance folliculaire 13
II.2.1.2. Atrésie folliculaire 13
II.2.1.3. Ovulation et maturation du complexe cumulus-ovocyte
14
II.2.1.3. 1. Ovulation 14
II.2.1.3.2. Maturation du complexe ovocyte-cumulus 14
II.2.1.4. Formation et évolution du corps jaune 16
II.2.2. Régulation hormonale de la fonction ovarienne
16
II.2.3. Évènements comportementaux 18
II.2.3.1. Saisonnalité 18
II.2.3.2. OEstrus 18
B. PRODUCTION IN VITRO D'EMBRYONS 19
I. Technique de collecte des ovocytes 19
I.1. Collecte des ovocytes à partir des ovaires
prélevés sur des animaux abattus (ex vivo) 19
I.1.1. Aspiration des ovocytes 19
I.1.2. Slicing des ovaires 19
I.1.3. Ponction des follicules 19
vii
I.1.4. Dissection des follicules 20
I.2. Collecte des ovocytes par ovum pick-up (in vivo)
20
II. Evaluation de la qualité des ovocytes 20
II.1. Evaluation des ovocytes sur la base du diamètre des
follicules 20
II.1. Evaluation sur la base des caractéristiques
morphologiques du cumulus oophorus 21
II. 2. Choix des ovocytes pour la maturation et la
fécondation in vitro 21
III. Maturation in vitro des ovocytes 22
IV. Fécondation in vitro des ovocytes 22
V. Culture des embryons 22
VI. Facteurs de variation de la population folliculaire, du
rendement et de la qualité ovocytaires
23
IV.1. Facteurs ovariens 23
IV.1. 1. Corps jaune 23
IV.1.2. Disposition des follicules dans le cortex ovarien 23
IV.1.3 Diamètre des follicules 24
IV.2. Facteurs non ovariens 24
IV.2.1. Race 24
IV.2.2. Age 25
IV.2.4. Note d'état corporel (NEC) 25
IV.2.4. Statut physiologique 26
V.3. Autres facteurs de variations du rendement et de la
qualité des ovocytes 27
VIII
V.3.1. Technique de collecte 27
V.3.2. Temps et température de transport. 27
CHAPITRE II : MATÉRIEL ET MÉTHODES 28
I. Site de l'étude 28
II. Animaux 28
III. Protocole expérimental 29
III.1. Identification de la race 29
III.2. Provenance des animaux 31
III.3. Poids des vaches 31
III.4. Note d'état corporel 31
III.5. Age 33
III.6. Statut physiologique 33
III.7. Prélèvement des ovaires 34
III.8. Détermination du poids et de la taille des
ovaires 34
III.9. Identification du corps jaune 35
III.10. Détermination de la population folliculaire
35
III. 11. Collecte et classification des ovocytes 36
IV. Analyses statistiques 36
CHAPITRE III : RÉSULTATS ET DISCUSSION 37
I. Résultats 37
I.1.
ix
Caractérisation des vaches abattues et des ovaires
37
I.1.1. Race 37
I.1.2. Age 37
I.1.3. NEC 38
I.1.4. Statut physiologique 38
I.1.5. Corps jaune 38
I.1.6. Poids des ovaires et des vaches 38
I.1.7. Taille des ovaires 40
I.2. Population folliculaire 42
I.3. Rendement en ovocyte 42
I.4. Qualité des ovocytes 43
I.5. Effet des facteurs ovariens sur la population
folliculaire, le rendement et la qualité des
ovocytes. 44
I.5.1. Localisation ovarienne 46
I.5.2. Corps jaune 46
I.5.3. Poids de l'ovaire 46
I.5.4. Taille de l'ovaire. 46
I.6. Variation de la population folliculaire, du rendement et
de la qualité des ovocytes en
fonction des facteurs non ovariens. 47
I.6.1. Race 49
I.6.2. Age 49
X
I.6.3. NEC 49
I.6.4. Statut physiologique 49
I.6.5. Stade de gravidité 50
II. Discussion 50
CONCLUSION 55
BIBLIOGRAPHIE 56
ANNEXE 64
xi
LISTE DES TABLEAUX
Page
Tableau I: Grille de notation de l'état corporel des
bovins 32
Tableau II: Méthode de détermination de l'âge
des bovins 33
Tableau III : Répartition des vaches en fonction de
l'âge 37
Tableau IV : Répartition des vaches en fonction du statut
physiologique 38
Tableau V : Variation du poids des ovaires et des vaches en
fonction de la race, de la NEC, de
l'âge, du statut physiologique et du corps jaune
39
Tableau VI : Variation de la taille des ovaires en fonction de la race,
de la NEC, de l'âge, du statut
physiologique et de la présence ou non du corps jaune .
41
Tableau VII: Variation du nombre des follicules en fonction des
facteurs ovariens 44
Tableau VIII : Variation du rendement et la qualité des
ovocytes en fonction des facteurs ovariens.
45
Tableau IX : Variation de la population folliculaire en fonction
des facteurs non ovariens 47
Tableau X : Variation du rendement et de la qualité des
ovocytes en fonction des facteurs non
ovariens 48
XII
LISTE DES FIGURES
Page
Figure 1: Structure histologique d'un ovaire 4
Figure 2 : Follicule primordial 7
Figure 3 : Follicules primaires 8
Figure 4 : Follicule secondaire 8
Figure 5 : Follicule tertiaire 9
Figure 6: Follicule mûr ou de De Graaf 10
Figure 7 : Vagues de croissances folliculaires chez la vache
11
Figure 8 : Notion de recrutement, sélection et dominance
d'un follicule chez la vache 12
Figure 9 : Enchaînement des rétroactions
réglant la fonction ovarienne 17
Figure 10: Distribution des vaches en fonction de la race 37
Figure 11 : Distribution des vaches en fonction de la NEC 38
Figure 12: Répartition du nombre des follicules en
fonction de leur diamètre 42
Figure 13 : Répartition des ovocytes en fonction de leur
qualité 44
XIII
LISTE DES PHOTOS
Photo n ° 1 : Ovaire d'une vache 3
Photo n ° 2 : Zébu Goudali 29
Photo n ° 3 : Zébu White Fulani 30
Photo n ° 4 : Zébu Red Fulani 30
Photo n ° 5 : Zébu Bokolo 31
Photo n ° 6 : Détermination du poids de l'ovaire
34
Photo n ° 7 : Détermination de la taille de
l'ovaire 34
Photo n ° 8 : Ovaire portant un corps jaune 35
Photo n ° 9 : Ovaire portant des follicules 35
Photo n ° 10 : Complexe Ovocyte-Cumulus 43
xiv
LISTE DES
ABRÉVIATIONS
AMPc : Adénosine 3':5'-Mono Phosphate
Cyclique
BCS : Body condition score
COC : Complexe Ovocyte Cumulus-oophorus.
DPBS : Dulbecco's Phosphate-Buffered
Saline.
ESMV : Ecole des Sciences et de
Médecine Vétérinaire.
FSH : Follicle-Stimulating Hormone.
FIV : Fécondation in vitro
G: gauge.
GnRH : Gonadotrophin-Releasing Hormone.
IGF-1 : Insuline Growth Factor 1
IRAD : Institut Agricole de recherché
pour le développement.
KD : Kilo Dalton.
LH : Luteinizing Hormone.
NaCl : Chlorure de sodium.
NEC : Note d'état corporel.
PIV : Production in vitro
d'embryon.
PTHO : Périmètre thoracique.
xv
RÉSUMÉ
Cette étude a été menée à
l'abattoir afin d'évaluer le potentiel ovarien de deux cent et une (201)
vaches locales dans la région de l'Adamaoua (Cameroun) pour la
production in vitro d'ovocytes fécondables. Quatre cent deux
(402) ovaires ont été prélevés puis
transportés au laboratoire dans une solution de NaCl à 9 %
endéans les deux heures qui suivaient l'abattage. Les follicules sur
chaque ovaire ont été comptés, leur diamètre (CD)
mesuré et classé en trois catégories: petits (CD < 3
mm), moyens (3 = CD = 8 mm) et gros (CD > 8 mm). Les ovocytes ont
été récoltés par le « slicing » de chaque
ovaire dans le Dubelcco's Phosphate Buffered-Saline, puis examinés sous
stéréoscope (10X) et classés en quatre groupes selon la
morphologie et l'expansion du complexe cumulus oophorus. L'effet des facteurs
ovariens (poids et taille des ovaires, position ovarienne et corps jaune) et
non ovariens (race, note d'état corporel, âge, état et
stade de gravidité) sur la population folliculaire, le rendement et la
qualité ovocytaires a été évalué. La
population folliculaire moyenne était de 16,75#177;0,83 par ovaire. La
population des petits, moyens et gros follicules étaient 8,39#177;0,60 ;
8,14#177;0,43 et 0,21#177;0,02 respectivement. Le rendement ovocytaire a
été de 10,97#177;0,57 par ovaire. Les ovocytes de qualités
I, II, III, IV étaient de 3,53#177;0,19 (32,21%) ; 2,72#177;0,15
(24,82%) ; 2,24#177;0,15 (20,44%) ; 2,47#177;0.20 (22,54%) respectivement.
L'index de la qualité ovocytaire était de 2,26. Les vaches
jeunes, présentant une note d'état corporel (NEC) = 3, non
gravides et portant de gros ovaires avaient un rendement plus
élevé en follicules et en ovocytes (P<0,05). Les ovocytes de
qualité I et II aptes à être maturés et
fécondés in vitro représentaient 57,15 %. Ces
résultats indiquent que les ovaires des zébus locaux
prélevés après abattage présentent une
potentialité moyenne pour la production in vitro d'embryons.
Mots clés : zébus, ovaires,
population folliculaire, qualité ovocytaire, embryon, Adamaoua.
xvi
ABSTRACT
An slaughterhouse study was conducted to evaluate the ovarian
potential of two hundred and one local zebu cattle from Ngaoundere, Adamawa
Region (Cameroon) for in vitro oocyte fertilization. The ovaries were
excised, submerged in normal saline solution (0.9%) and transported to the
laboratory for evaluation within 2 hours of collection. Follicles on each ovary
were counted, their diameters (CD) measured and grouped in 3 categories: small
(CD <3 mm), medium (3 = CD = 8 mm) and large (CD > 8 mm). Each ovary was
then sliced into a petri dish, the oocytes recovered in Dulbecco's phosphate
buffered saline, examined under a stereoscope (x 10) and graded into four
groups based on the morphology of cumulus oophorus cells and cytoplasmic
changes of the oocytes. The effects of both ovarian (ovarian localization,
corpus luteum, size and weight of ovary) and non-ovarian factors (breed, age,
BCS and pregnancy status of cow) on the follicular population and oocyte
recovery rate were determined. There was an average of 16.75 #177; 0.83
follicles per ovary. The number of small, medium and large follicles were 8.39
#177; 0.60, 8.14 #177; 0.43 and 0.21 #177; 0.02 respectively. Oocyte recovery
rate was 10.97 #177; 0.43 per ovary. Oocytes graded I, II, III and IV were 3.53
#177; 0.19 (32.21%), 2.72 #177; 0.15 (24.82%), 2.24 #177; 0.15 (20.44%) and
2.47 #177; 0.20 (22.54%) respectively. The oocyte quality index was 2.26.
Younger, non-pregnant cows with a body condition score (BCS) = 3 and large
ovaries presented higher number of follicles and oocytes (P < 0.05). Oocytes
acceptable quality (grade I and II) for in vitro maturation and
fertilization constituted 57.15% of the harvest. These results indicate that
ovaries of local Zebu harvested after slaughter have a moderate potential for
in vitro embryo production.
Keys words: zebus, ovaries, follicular
population, oocyte quality, embryo, adamawa.
1
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