III-4- CRIBLAGE
PHYTOCHIMIQUE
III-4-1- Coupes histochimiques
(18, 36)
Elles ont pour but la mise en évidence de certains
principes dont les oxalates dans la plante. Pour cela nous utilisons la plante
entière fraîche.
Des coupes transversales très fines sont
réalisées à travers les racines, la tige et les feuilles
(nervure principale) avec la moelle de sorgho comme support.
Ces coupes sont ensuite observées au microscope optique
entre lame et lamelle d'abord dans de l'eau distillée et ensuite dans
une solution de carbonate de calcium (CaCO3) 4% au cas où on
n'observerait pas de cristaux d'oxalate de calcium.
Dans tous les cas l'observation de cristaux d'oxalate de
calcium indique que la partie concernée de la plante contient des
oxalates soit sous forme d'acide oxalique libre (ce qui est rare car en
général toxique pour la plante), soit sous forme d'oxalate de
magnésium, de potassium ou de calcium.
III-4-2- Extractions (25,
30)
III-4-2-1- Extractions solide-liquide
Elles sont réalisées par épuisements
successifs de la poudre végétale à l'aide de solvants de
polarité croissante.
Ces solvants sont consignés dans le tableau 2.
Dans cette partie nous définirons le rendement
d'extraction qui est le rapport entre l'extrait séché et la prise
d'essai (Masse de poudre végétale utilisée pour
l'extraction) pour 100 unités de masse de poudre
végétale.
r = (Masse d'extrait sec / prise d'essai) x 100
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Tableau 2: Solvants utilisés pour les
extractions
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Solvants
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Polarités
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n-hexane : CH3-(CH2)4-CH3
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0,01
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Méthanol : CH3-OH
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0,95
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Eau distillée : H2O
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1,0
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III-4-2-1-1- Extractions à chaud
Ici il s'agira des extractions avec le n-hexane et le
méthanol.
Dans les deux cas on utilisera l'extracteur de SOXHLET dont le
principe de fonctionnement dans notre cas est le suivant:
L'appareillage comporte un chauffe-ballon, un ballon de 500 ml
dans lequel le solvant est chauffé jusqu'à sa température
d'ébulition et vaporisé, un réfrigérant qui
condense les vapeurs et un extracteur de 250 ml à l'intérieur
duquel est introduit dans une cartouche poreuse le produit à extraire
(la poudre végétale) et où retombe le solvant
condensé dans le réfrigérant. Un siphon permet de vider
périodiquement l'extracteur de la solution obtenue. La solution retombe
alors dans le ballon où se concentrent les extraits.
Par ce procédé, la poudre végétale
est successivement épuisée à l'aide du n-hexane et du
méthanol.
- Extraction par le n-hexane
30 g de poudre végétale introduite dans la
cartouche est introduite dans l'extracteur. Le ballon est rempli aux 2/3 du
solvant d'extraction (n-hexane) puis chauffé à 68-69° C
(température d'ébulition du n-hexane).
L'extraction terminée, la solution obtenue est
concentrée à l'évaporateur rotatif, puis
séchée à la température ambiante du laboratoire. Le
résidu est pesé et gardé au congélateur
jusqu'à la mise en marche des tests phytochimiques et
pharmacologiques.
Le marc est séché et gardé pour
l'extraction au méthanol.
- Extraction par le méthanol
Le marc issu de l'extraction précédente est
soumis au même processus d'extraction que précédemment mais
cette fois-ci avec le méthanol comme solvant en chauffant à
environ 64,9° C (température d'ébulition du
méthanol).
La solution obtenue est concentrée à
l'évaporateur rotatif; puis séchée à la
température ambiante du laboratoire. Le résidu obtenu est aussi
pesé et conservé au congélateur jusqu'à la mise en
marche des tests phytochimiques et pharmacologiques.
Le marc issu de cette extraction est séché et
conservé pour l'extraction à l'eau distillée.
III-4-2-1-2- Extraction à froid
- Extraction à l'eau
distillée
Le marc issu de l'extraction par le méthanol est
introduit dans une fiole jaugée de 500 ml contenant 300 ml d'eau
distillée. Le mélange est laissé en macération
pendant 24 heures sous agitation magnétique à la
température ambiante du laboratoire (environ 25° C).
Le mélange est ensuite filtré et le filtrat est
séché à l'étuve à 80° C. Le
résidu est pesé et conservé au congélateur pour les
tests phytochimiques et pharmacologiques.
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