II.2. METHODES
II.2.1. Préparations
des différentes fractions pectines et hydrosolubles à froid des
plantes (Alarcon-Aguilar et al., 2003)
Les plantes préalablement récoltées et
séchées au soleil, ont été broyées en une
poudre fine. 100g de poudre de chacune des deux plantes ont été
introduits ensuite dans 600 ml d'eau distillée après avoir
délipidé dans 400 ml d'hexane, pour un séjour de 48 heures
à température ambiante puis filtré. Le filtrat (produit
A) a été concentré à
l'évaporateur rotatif. Le résidu a été bouilli
à 80°C successivement dans l'éthanol à 95°
pendant 1 heure; dans le mélange méthanol/chloroforme (V/V)
pendant 24 heures; ensuite dans du méthanol pur pendant 4 heures et
enfin dans l'acétone pendant 24 heures. L'ensemble a été
centrifugé à 4000g pendant 30 minutes et le culot (produit
B) a été récupéré dans un
pilulier en verre vide et mis à l'étuve sous la nuit à
40°C.
Les polysaccharides hydrosolubles à froid ont
été obtenus à partir du produit A. Pour
cela, l'addition de 4 volumes d'éthanol à 95°C au produit a
permis de précipiter ces polysaccharides. Le mélange a
été centrifugé à 4000g pendant 30 minutes. Le
précipité récupéré a été
successivement solubilisé dans de l'eau, purifié par dialyse puis
lyophilisé.
La fraction pectine a été obtenue à
partir du produit B. Pour cela, ce dernier a été
bouilli dans l'oxalate de sodium 0,5% puis centrifugé à 4000g
pendant 30 minutes. Le surnageant a été
récupéré puis neutralisé à l'acide
acétique afin d'obtenir le précipité. Ce
précipité a été purifié par dialyse puis
lyophilisé.
II.2.2. Préparations
des solutions à administrer
Les différentes poudres ont été
pesées et dispersées dans de l'eau distillée chaude
(pectines) et froide (hydrosolubles à froid). Connaissant la dose X en
mg/kg de poids corporel P (Kg) pour un groupe d'animaux et le volume V à
administrer (10 ml/kg de poids corporel), la concentration de la solution
(mg/ml) est déterminée par :
X (mg/kg) x P (kg)
V (ml)
Concentration (mg/ml) =
II.2.3. Etude des
propriétés antihyperglycémiantes des différentes
fractions : Test d'hyperglycémie provoquée par voie orale
(OGTT) (Bonner-weir, 1988)
Cette épreuve a été
réalisée pour évaluer la glucotolérance
c'est-à-dire la capacité régulatrice de l'organisme
vis-à-vis d'une surcharge glucidique en présence des fractions
polysaccharidiques.
Echantillonnage
Pour cela, 30 rats mâles normoglycémiques de
poids moyen 210 grammes ont été répartis en 6 groupes de 5
rats, mis à jeun 18 heures à la veille et traité comme
suit :
- 1 groupe reçoit par gavage uniquement de l'eau
distillée (control négatif);
- 1 groupe reçoit par gavage du glucose (2 g/kg) et de
l'eau distillée (control positif);
- 1 groupe reçoit par gavage du glucose (2 g/kg) et 100
mg/kg de la fraction pectine de Chromolaena odorata (Essai1) ;
- 1 groupe reçoit par gavage du glucose (2 g/kg) et 100
mg/kg de la fraction pectine de Harungana madagascariensis (Essai
2) ;
- 1 groupe reçoit par gavage du glucose (2 g/kg) et 75
mg/kg de la fraction hydrosoluble à froid de Chromolaena
odorata (Essai 3) ;
- 1 groupe reçoit par gavage du glucose (2 g/kg) et 75
mg/kg de la fraction hydrosoluble à froid de Harungana
madagascariensis (Essai 4).
Le gavage a été effectué à l'aide
d'une sonde gastro-oesophagienne.
Traitement
La première glycémie (glycémie de base)
a été faite avant administration des différents produits
(fractions et glucose). Les fractions ont été administrées
par gavage 1 heure avant l'administration du glucose. La glycémie a
été successivement déterminée aux instants 0h, 1h,
1h30, 2h et 3h. Tous les animaux étaient maintenus à jeun durant
toute l'expérience.
La glycémie a été
déterminée dans du sang capillaire. Une légère
incision au bout distal de la queue des rats permettait d'obtenir une goutte de
sang qui était immédiatement déposée sur la plage
réactive d'une bandelette de type SD-Check et la lecture de la
glycémie était automatiquement faite à l'aide d'un
glucomètre de type SD-Check.
Les fractions, qui ont eu la
propriété d'abaisser significativement l'hyperglycémie
provoquée chez les rats, ont été
sélectionnées pour l'évaluation des
propriétés hypolipidémiantes.
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