II.2.4. Etude des
propriétés hypolipidémiantes des fractions
sélectionnées
Dans cette expérience 20 rats normolipidémiques
ont été utilisés. Les animaux ont été rendus
hyperlipidémiants par injection intraveineuse de 300 ul de Triton
WR-1339 (Tyloxapol - Sigma Aldrich) à la dose de 850
mg/kg, 2 à 3 jours avant le début du traitement
(Wattiaux et Wattiaux, 1967). Les animaux ayant un
taux sérique de triglycérides et de cholestérol total
supérieur à 200 mg/dl ont été retenus pour
évaluer l'activité hypolipidémiante des fractions. Les
rats ont été divisés en 4 groupes de 5 animaux chacun
après un dépistage et repartis comme suit :
- 1 groupe control négatif non traité recevant
par gavage uniquement le véhicule (NaCl)
- 1 groupe control positif non traité recevant par
gavage uniquement du triton dissout dans le NaCl
- 2 groupes essais traités recevant par gavage la
fraction pectine de Chromolaena odorata à la dose de
100 mg/kg et de 200mg/kg pendant 48 heures.
A la fin du traitement, après au moins 12 heures de
jeun, les animaux ont été sacrifiés sous
légère anesthésie à la vapeur d'éther. Le
sang collecté dans les tubes EDTA, a été centrifugé
à 3000 trs/min pendant 10 min ; le surnageant (plasma) a servi pour
le dosage enzymatique du cholestérol total, du cholestérol HDL et
des triglycérides et du malondialdéhyde. Le taux de
cholestérol LDL a été évalué par la formule
de Friedewald et al. (1972); le culot sanguin a servi à la
préparation des hémolysâts tandis que le foie
prélevé a servi à la préparation des
homogénats de foie pour le dosage de la catalase, des hydroperoxydes et
des protéines.
II.2.5. Estimation des
paramètres biochimiques d'intérêts
II.2.5.1. Dosage du
cholestérol total (Richmond, 1973)
a) Principe
La cholestérol estérase catalyse l'hydrolyse
des esters de cholestérol en cholestérol libre et acides gras. Le
cholestérol libre y compris celui présent à l'origine est
alors oxydé par la cholestérol oxydase (CHOD) en
4-cholestèn-3-one et en peroxyde d'hydrogène. En présence
de la peroxydase (POD), le phénol et le 4-aminoantipyrine se combinent
avec le peroxyde d'hydrogène pour former un chromophore rouge (la
quinonéimine) qui absorbe entre 500 et 550 nm. L'intensité de la
coloration est directement proportionnelle à la concentration de
cholestérol total présent dans l'échantillon.
Cholestérol estérase
Cholestérol oxydase
Peroxydase
Esters de cholestérol + H2O
cholestérol + acides gras libres
Cholestérol + O2
4-cholestèn-3-one + H2O2
2H2O2 + phénol + 4-aminoantipyrine
quinonéimine + 4H2O
b) Réactifs
R1 : Tampon
Tampon PIPES pH
6,9.......................................................90mmol/l
Phénol...........................................................................26mmol/l
R2 : Réactif enzyme
Cholestérol
estérase.............................................................300U/L
Cholestérol
oxydase.............................................................300U/L
Peroxydase............
.........................................................1250U/L
4-aminoantipyrine.........................................................
....0.4mmol/l
R3 : Solution étalon
cholestérol
standard..........................................................200 mg/dl
R1 + R2 : Solution de travail
La solution de travail est stable pendant quatre mois entre
2°C à 8°C ou pendant 40 jours entre 15 à 25°C.
c) Mode opératoire
Dans des tubes étiquetés blancs, étalon
et essai ont été introduits respectivement 10 ul d'eau
désionisée, d'étalon ou d'échantillon à
analyser et 1000ul de réactif. Mélanger et incuber pendant 5
minutes à 37°C ou 10 minutes à température
ambiante.
Lire l'absorbance de l'échantillon contre le blanc
réactif à 505 nm à l`aide d`un
spectrophotomètre.
d) Expression des résultats
La concentration en cholestérol total
dans le sérum est donnée par la relation :
DO échantillon
DO étalon
x 200 (mg/dl) =
[cholestérol total] (mg/dl)
[Cholestérol total] (mmol/l) = 0,0259 ×
[cholesterol total] (mg/dl)
Valeurs de référence : Sérum -
Plasma < 200 mg/dl
| 
