Si la quantité d'Ag augmente, la concentration
du complexe Ag-Ac augmente également de telle façon que le
rapport [AcAg*]/[Ac] .[Ag*] reste constant. Si l'Ag non marqué est
ajouté au milieu le phénomène est doublé :
d'une part il y a augmentation de la concentration du complexe Ag-Ac, d'autre
part il se produit un déplacement sur les sites de fixation de l'Ac, des
molécules d'Ag marqué par des molécules d'Ag non
marqué .lorsque, dans un tel système, on augmente la
quantité d'Ag non marqué, on déplace l'Ag marqué.
La radioactivité de l'Ag marqué lié à l'Ac diminue.
La figure en dessous représente l'aspect typique d'un étalonnage
en radio immunologie.
Condition :
·
L'antigène marqué doit présenter une haute activité
spécifique et une bonne stabilité.
· Les
laboratoires doivent être équipés d'un spectromètre
de détection et respecter en outre les contraintes de
sécurité et de réglementation définies quand
à l'emploi « in vitro » de substances
radioactives.
· L'Ag est
totalement pur après le marquage radio actif : actuellement, le
marqueur radioactif le plus utilisé en immuno-analyse est l'iode 125.
Phénomène de compétition entre
deux Ag, l'un marqué et l'autre froid :
La technique radio immunologie est basé sur un
phénomène de compétition entre un antigène
marqué par radio isotope et un antigène non marqué que
l'on veut doser ; cette compétition s'exerce vis-à-vis d'un
anticorps spécifique. L'Ag à doser est placé en même
temps que l'Ag marqué sur une plaque recouverte de l'Ac
spécifique. Plus il y a d'Ag dans l'échantillon, moins les Ag
marqué peuvent lier l'Ac
Exemple d'un dosage de mélatonine extraite
chez le mouton :
Le principe est de créer une compétition entre
de la mélatonine marquée radioactive (mélatonine chaude)
et de la mélatonine non marquée (dite froide). Des anticorps anti
mélatonine sont saturés de mélatonine radioactive. L'ajout
de mélatonine non radioactive va générer une
compétition. Plus il y aura de mélatonine froide dans le tube et
plus la compétition est forte. L'anticorps va donc se décharger
de sa mélatonine radioactive. Et ensuite on récupère
l'anticorps et on compte la radioactivité qui lui est
associée.
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