CONCLUSIONS
Les formes non viables des bactéries font l'objet de
nombreuses études. Les récentes publications montrent que les
difficultés rencontrées à cultiver les microorganismes
stressés sont dues à une méconnaissance de l'état
VNC. La physiologie des cellules non cultivables est mal connue. Certaines
études proposent des solutions, par l'intermédiaire de facteurs
de croissance ou d'antioxydants. Ce qui amène à reconnaître
le fait que si microorganismes non cultivables il y a, c'est que nous ne
connaissons pas les solutions permettant de les rendre cultivables.
Les difficultés rencontrées pour cultiver toutes
les bactéries présentes dans notre environnement et dans nos
aliments rendent l'analyse de ces germes plus complexe. C'est pourquoi
différentes méthodes ont été
développées afin de pouvoir détecter et dénombrer
toutes les bactéries viables. Ces méthodes se basent sur la mise
en évidence de caractéristiques de l'état viable :
· Activité enzymatique ou métabolique et
respiration cellulaire.
· Etat des membranes.
· Production d'acides nucléiques (RNA).
La plupart de ces méthodes permettent de détecter
les cellules viables, mais pas de les identifier ni de les isoler. A
l'exception de la RT-PCR qui permet une recherche par espèce.
La RT-PCR permet effectivement de savoir quels types de germes
se trouvent dans la matrice étudiée grâce à des
amorces spécifiques, mais ne permet pas de les isoler. De plus, le
coût d'une analyse en PCR est trop élevé et ne pourrait
actuellement pas servir de méthode normalisée de recherche de
germes pathogènes dans des matrices alimentaires ou
environnementales.
Une des techniques les plus intéressantes et
déjà commercialisée (BactiFlow®,
AES-Chemunex) est la cytométrie en flux. La CMF permet le
dénombrement des cellules viables, la séparation physique entre
les cellules viables et les cellules mortes. Un des atouts majeur de la CMF est
la rapidité dans le traitement des matrices à analyser.
Malgré tout, les méthodes culturales sont
aujourd'hui encore privilégiées dans les normes de recherche des
germes pathogènes. C'est pourquoi les recherches sont encore
tournées vers la microbiologie Pasteurienne, essayant de définir
les molécules nécessaires à la croissance des germes
VNC.
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