3.2.4.2 Paramètres bactériologiques
Il est théoriquement, techniquement et
financièrement impossible de contrôler dans l'eau de boisson tous
les microorganismes pathogènes susceptibles d'engendrer des maladies
d'origine hydrique. Néanmoins le dénombrement de quelques
bactéries permet de suivre l'évolution de la qualité
microbiologique d'une eau.
L'essentiel des analyses bactériologiques consistera en
une recherche présomptive de Coliformes totaux sur le bouillon
Mac-Conkey et un dénombrement des colonies par millilitre après
24 et 48 heures d'incubation à l'étuve à 37°C en
milieu «Gélose nutritive». Six milieux de cultures seront
utilisés pour la recherche des germes indicateurs de pollution
fécale. Ce sont les milieux Eosine Bleu de Méthylène
(EMB), Slanetz, Chapmann, Trypcase Sulfite Néomycine (TSN),
Gélose SS, Gélose d'Endo.
Les analyses bactériologiques sont réalisées
au Laboratoire de la Direction de l'Hygiène et de l'Assainissement de
Base (DHAB) à Akpakpa (Cotonou).
Procédure générale de
recherche des germes dans l'eau
La procédure suivie pour les analyses
bactériologiques suit la logique de l'algorithme
représentée par la figure ci-dessous. Cette procédure
comporte plusieurs étapes à savoir:
a)- Etape 1: Dans un premier temps,
l'analyste recherche la présence de germes banals ou autochtones dans
l'eau. A ce niveau deux cas de figures sont possibles: la recherche est
négative c'est-à-dire qu'aucun germe n'a été
décelé dans l'eau analysée. Cette eau est alors
déclarée `' très saine ou très pure» et les
analyses sont limitées à cette étape. Dans le cas
où la recherche est positive, cela traduit la présence d'au moins
un germe dans l'eau. Les analyses doivent être poursuivies avec la
recherche présomptive des Coliformes.
b)- Etape 2: La recherche
présomptive s'effectue sur le bouillon Mac-Conkey ou Tergitol au TTC. La
présence des Coliformes se traduit par la fermentation de lactose avec
production de gaz. Si les résultats sont négatifs, cela signifie
absence des Coliformes et il existe deux possibilités: les eaux
traitées contenant 20 germes/ml au maximum et celles non traitées
renfermant moins de 50 germes/ml sont déclarées saines tandis que
les eaux traitées et les eaux non traitées ayant respectivement
plus de 20 germes et 50 germes par millilitre sont déclarées
suspectes et nécessitent un renforcement de traitement avant
d'être consommées. Dans le cas où les analyses se
révèlent positive c'est-à-dire fermentation de lactose et
production du gaz, alors l'eau est soit fortement suspecte soit
souillée. Les analyses sont approfondies avec l'identification des
Coliformes et autres indicateurs de pollution fécale.
c)- Etape 3: La recherche des
Coliformes fécaux, notamment Escherichia coli se fait sur le milieu
gélose Eosine Bleu de Méthylène (EMB). Si elle se
révèle négative, alors la fermentation du lactose a
été produite, soit par Aeromonas, soit par les Coliformes
telluriques ou aquatiques. L'eau est alors reconnue définitivement
suspecte. Toutefois, pour les eaux de surface désinfectées, il
est nécessaire de rechercher les entérocoques, en l'occurrence,
les Streptocoques fécaux qui sont plus résistants aux
désinfectants classiques que les E. coli. Si la
recherche des E. coli est positive, c'est donc la preuve d'une
contamination fécale, l'eau est alors qualifiée de `'fortement
polluée». En outre, pour mieux caractériser cette pollution
fécale, les recherches peuvent déboucher sur celle des
Clostridium perfringens afin de déterminer la nature de la contamination
(ancienne ou récente).
d)- Etape 4: Les recherches continuent
pour la détermination d'autres agents pathogènes tels que
Salmonella, Shigella, Staphylocoques et Pseudomonas.
Généralement, ces identifications s'effectuent en cas
d'épidémie ou au cours des travaux de recherche sur des
échantillons peu connus.
Recherche des germes
Escherichia coli:
La gélose Eosine Bleu de Méthylène (EMB)
permet l'isolement des entérobactéries GRAM négatif, les
autres germes étant inhibés par les colorants. Ce milieu permet
de distinguer les colonies d'entérobactéries pathogènes,
des colonies fermentant le lactose, le saccharose, ou les deux. Sur ce milieu
les colonies de Salmonella et de Shigella apparaissent incolores ou
légèrement teintées et transparentes, celles d'Escherichia
coli sont bleu foncé et présentent un reflet métallique
lorsqu'on les examine en lumière réfléchie. Les autres
coliformes donnent de grosses colonies convexes muqueuses et brunâtres.
Le dénombrement de ces colonies se fait après 48 heures
d'incubation à une température de 44°C.
Les streptocoques fécaux:
La gélose de Slanetz permet d'isoler et de
dénombrer les streptocoques fécaux. La lecture se fait
après 48 heures d'incubation à la température de
37°C; les colonies apparaissent rouges, violettes ou roses sur la
boîte.
Clostridium perfringens:
La gélose de TSN permet l'identification et le
dénombrement de C. perfringens. La lecture se fait après 48
heures d'incubation à la température de 46°C.
Les Staphylocoques fécaux:
Le milieu de Chapman est utilisé pour l'isolement et la
numération des Staphylocoques. Le pouvoir inhibiteur du chlorure de
sodium permet d'ensemencer
abondamment les boîtes qui sont maintenues, en
général, pendant 36 heures à l'étuve. Après
ce délai, les colonies de Staphylocoques présumés non
pathogènes apparaissent petites et entourées d'une zone rouge ou
pourpre. Les colonies de Staphylocoques fermentant le mannitol sont
entourées d'une zone jaune. Il faudra faire une recherche de coagulasse
sur ce type de colonies.
Les Coliformes:
La gélose d'Endo est utilisée pour mettre en
évidence les Coliformes dans l'eau. Les colonies de Coliformes lactose
sont plus roses, les colonies des autres entérobactéries
(comprenant les Salmonella et les Shigella) sont incolores.
La gélose SS est aussi utilisée pour identifier
les Coliformes ; les colonies qui le fermentent tels que les Coliformes lactose
sont roses ou rouges, ceux qui ne le fermentent pas sont incolores.
Shigella:
La gélose SS (Salmonella-Shigella) et la gélose
Drigalski sont utilisées pour mettre en évidence les Shigella. La
lecture se fait après 24 heures d'incubation à la
température de 37°C. En utilisant la gélose SS ; les
colonies sont translucides, incolores et ont 1 à 2 mm de
diamètre. Avec la gélose Drigalski ; les colonies de 2 à 3
mm de diamètre sont bleu-vert.
Pseudomonas aeruginosa:
L'isolement de P. aeruginosa peut être effectué
en utilisant des milieux sélectifs contenant des produits antiseptiques
comme un ammonium quaternaire (cétrimide) additionné ou non d'un
antibiotique type acide nalidixique : gélose sélective de Difco,
Pseudogel agar de BBL, Pyocyanosel de bioMérieux, gélose
sélective pour pyocyanique de Diagnostics Pasteur. Une incubation
à 41°C permettra une culture sélective de P. aeruginosa
contrairement à la plupart des autres Pseudomonas qui ne se
développent pas à cette température. Les colonies sont
plus petites rugueuses et présentent un aspect « rough »
à centre convexe.
Vibrions cholériques:
La gélose TCBS (Thiosulfate de sodium-Citrate de
sodium-bile de boeufsaccharose) est utilisée pour l'isolement et la
numération des Vibrions. Après
Non
incubation de 18 à 24 heures à 36°C, les
colonies ont un diamètre de 2 à 3 mm et sont soit jaunes, suite
à l'acidification par utilisation du saccharose, soit vertes (saccharose
non utilisé).
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1
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Présence de germes banals
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(Gélose ordinaire)
Recherche présomptive de coliformes
2
Mac-conkey ou Tergitol au TTC
Recherche des coliformes fécaux (Escherichia
coli)
3
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Négative
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Positive
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Recherche d'Aéromonas,
coliformes
telluriques ou aquatiques
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Streptocoques fécaux
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Négative
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Positive
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Clostridium sulfito-réducteur
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Identification des germes
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4
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Salmonella
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Shigella
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Figure n°15: Algorithme de recherche des
germes dans les eaux de
puits
(Source : laboratoire central de la SONEB)
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Staphylocoques
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Pseudomonas
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86
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