II.2.4.4 Dosages des paramètres
hématologiques
? Numération des formules sanguines
(NFS)
Les paramètres hématologiques tels que les
globules blancs, les lymphocytes, les granulocytes, les globules rouges,
l'hémoglobine, l'hématocrite et les plaquettes sanguines ainsi
qu'aux constantes érythrocytaires et leucocytaires ont été
déterminés automatiquement par l'analyseur hématologique
AUTOMATE du type « coulter-Counter » du laboratoire de
l'hôpital régional de N'Gaoundéré.
II.2.4.5 Dosage des paramètres de
toxicités. a) Dosage de l'alanine aminotransférase
L'Alanine Aminotransférase (ALAT), encore
appelée transaminase glutamique pyruvique catalyse le transfert
réversible d'un groupe amine à partir de l'alanine vers l'alpha
cétoglutarate avec la formation de glutamate et pyruvate. Le pyruvate
produit est réduit en lactate déshydrogénase (LDH) et
NADH. Les taux d'alanine et d'aspartate aminotransférase ont
été déterminés à l'aide du kit Randox selon
la méthode de Reitma et al. (1957).
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Alanine aminotransferase
Alanine + á-cétoglutarate glutamate + pyruvate
Lactate déshydrogénase
Pyruvate + NADH + H lactate + NAD
? Mode opératoire
Dans les tubes de dosage et du blanc, sont introduit
respectivement 0,1 mL d'échantillon et 0,1 mL d'eau distillée,
ensuite nous avons ajouté dans chacun de ces tubes, 0,5 mL de solution
tampon. La solution obtenue est mélangée et incubée
à 37°C pendant 30 min. Après incubation nous avons
également introduit dans ces tubes, 0,5mL de solution de
2,4-dinitrophénylhydrazine le mélange a été fait et
les solutions incubées à 25°C pendant 20 min. Dans les
solutions obtenues, 5 mL de solution d'hydroxyde de sodium sont introduits et
l'absorbance de l'échantillon contre le blanc est lue après 5
minutes à 546 nm).
b) Dosage de l'aspartate
aminotransférase
L'aspartate aminotransférase (ASAT), encore
appelée transaminase glutamate oxaloacétate (TGO) catalyse le
transfert réversible du groupement aminé de l'aspartate vers
l'alphacétoglutarate avec la formation du glutamate et
oxalo-acétate. L'oxalo-acétate produit est réduit en
malate en présence de malate déshydrogénase (MDH) et
NADH.
Aspartate aminotransférase
Aspartate + á cétoglutarate Glutamate +
oxaloacétate
Lactate déshydrogénase
Oxaloacétate + NADH + H Malate + NAD
? Mode opératoire
La solution du substrat de L'ASAT (0,1mL) a été
introduite dans les tubes du blanc et des essais et préincubée
à 37 °C pendant 5 min, puis 0,02 mL de sérum y ont
été ajoutés dans les tubes essais. Après une
incubation à 37 °C pendant 1 h, 0,1 mL de réactif de
coloration a été ajouté. Les tubes ont été
laissés à température ambiante pendant 20 min, puis la
réaction a été arrêtée par ajout de 1 mL de
Na0H 0,4N. L'absorbance a été lue à 505 nm contre le tube
blanc.
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C) Dosage de la créatinine
La créatinine a été dosée suivant
la méthode d'Henry (1974), le kit Randox a été
utilisé.
? Principe
Il est basée sur la réaction de l'acide picrique
avec la créatinine en milieu basique formant un complexe coloré
en jaune orange.
? Mode opératoire
Dans les tubes à centrifugation a été
introduit, 1 mL d'acide trichloracétique et 1 mL de plasma. La solution
obtenue a été mélangée, centrifugée à
2500 trs/min pendant 10 minutes et le surnageant a été recueilli.
Dans les tubes blanc et standard a été introduit 0,5 mL de
solution d'acide trichloracétique, ensuite 1 mL de surnageant, 0,5 mL,
d'eau distillée et 0,5mL de solution d'étalon ont
été introduit respectivement dans les tubes de dosage, blanc et
standard dans tous ces tubes a été également ajouté
1 mL de solution travail qui est mélange V/V d'acide picrique et
d'hydroxyde de sodium. Le mélange obtenu dans chaque tube est
laissé au repos pendant 20 minutes à 25°C et l'absorbance
lue contre le blanc à 520 nm. L'intensité de la coloration est
mesurée à une longueur d'onde de 530 nm.
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