Partie bibliographique
I. Maladie de la rubéole 2
II. Caractéristiques cliniques 2
III. Infection par le virus de la rubéole . 3
III.1.La rubéole acquise 3
III.2.Réinfection rubéolique 3
III.3.La rubéole congénitale . 3
IV. Virus de la rubéole . 4
IV.1.Historique 4
IV.2. Classification du virus de la rubéole ... 5
IV.3. Morphologie du virus .. 6
IV.4.Type et classification antigénique 6
IV.4.1. Protéines non structurales . 7
IV.4.2. Protéines structurales 7
IV.5.Génome du virus de la rubéole . 8
IV.6.Réplication du virus . 9
V. Réponse immunitaire ... 10
VI. Epidémiologie et prévention .. 11
VI.1.Epidémiologie 11
VI.2.Prévention et vaccination 12
VI.2.1. Prévention 12
VI.2.2. Vaccination 12
VII. Cellule BHK21 et multiplication du virus de la
rubéole à l'échelle cellulaire 13
VII.1. Cellule BHK21 13
VII.2. Multiplication du virus de la rubéole a
l'échelle cellulaire 13
VIII. Diagnostic 14
VIII.1.Diagnostic direct 15
VIII.1.1.Recherche du virus par isolement en culture de cellules
15
VIII.1.2.Détection du génome viral .. 15
VIII.2.Diagnostic indirect . 17
VIII.2.1.Centrifugation en gradient de saccharose 17
VIII.2.2.Mesure de l'avidité spécifique des IgG ..
17
VIII.2.3.ELISA (Enzyme-Linked-Immuno Sorbent Assay) 17
VIII.2.4.Agglutination sur latex 18
VIII.2.5.Hémolyse radiale (HR) 19
VIII.2.6.Test de neutralisation .. 19
VIII.2.7.Technique de fixation du complément 19
VIII.2.8.Test d'Inhibition d'hémgglutination (IHA) 20
VIII.2.9.Hémagglutination virale . 20
Matériel et méthodes
I. Préparation du local et matériel 21
I.1.Préparation du local 21
I.1.1. Stérilisation de l'atmosphère ... 21
I.2.Préparation du matériel 21
I.2.1. Stérilisation du matériel ... 21
I.3. Contrôle de stérilité du local ...
22
II. Matériel utilisé pour la production et la
validation de l'hémagglutinine (HA)
rubéolique . 22
II.1.Appareillage et matériel
technique de culture cellulaire et test ELISA indirect
type IgG 22
II.2.Réactifs chimiques et Tampons pour
la production et validation de l'HA
rubéolique . 23
III. Milieu pour culture cellulaire . 23
III.1. Milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) 23
III.2. Additifs pour milieu DMEM 24
III.2.1.La trypsine . 25
III.2.2.Préparation du milieu de culture par la
méthode de stérilisation à froid .. 25
III.3. Contrôle de stérilité du milieu de
culture et des additifs . 26
IV. Production de l'HA rubéolique 27
IV.1.Matériel biologique .. 27
IV.2. Procédé de production de l'HA
rubéolique par la technique de culture
cellulaire 27
IV.2.1.Décongélation des cellules BHK21 28
IV.2.2.Les différents passages lors de la culture des
cellules BHK21 . 28
V. Inoculation du virus M33 30
V.1. Récolte 31
V.2. Extraction de l'HA rubéolique 31
V.3. Titrage de l'HA rubéolique par la technique
d'hémagglutination 31
V.3.1. Etape de titrage de l'HA 32
VI. Validation du procédé de production de l'HA
rubéolique par le test ELISA
indirect type IgG 33
VI.1. Matériel biologique . 33
VI.2. Principe et étapes du test ELISA . 33
VI.2.1. Principe 33
VI.2.2. Réalisation du test ELISA indirect type IgG
34
Résultats et discussion . 37
Conclusion et perspectives . 43
Références bibliographiques ..
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