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Validation de procédé de production d'antigène viral sur culture cellulaire BHK21

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par Ghaith Ben Messaoud
Institut supérieur des technologies médicales de Tunis - Licence appliquée en biotechnologies médicales 2013
  

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Annexes


·

C: Protéine C


·

BHK21: Baby Hamster Kidney


·

E1: Protéine E1


·

RK 13: Rabbit kidney


·

E2: Protéine E2


·

ECP: effet cytopathique

 


·

HA: Hémagglutinine


·

HR: Hémolyse radiale


·

ARN: acide ribonucléique


·

IHA: Inhibition d'hémagglutination


·

S: coefficient de sédimentation


·

ELISA: Enzyme-Linked-Immuno

 
 
 

Sorbent Assay


·

DMSO: diméthysulfoxyde


·

PCR: Polymerase Chain Reaction


·

nm: nanomètre


·

RT-PCR: Reverse Transcriptase

 
 
 

PCR


·

kDa: kilo Dalton


·

Nested PCR: PCR nichée


·

Kb: kilobase


·

DMEM: Dulbecco's Modified Eagle

 
 
 

Medium


·

IgM: immuglobuline M


·

SVF: Sérum de veau foetal


·

IgG: immuglobuline G


·

ATB: Antibiotique


·

Ig A : immuglobuline A


·

GR: globules rouges


·

HLA: Human leukocyte antigen


·

UHA: unité hémagglutinante


·

Ac: Anticorps


·

OPD: Ortho-Phénylène-Diamine


·

Ag: Antigène


·

LIRB: Laboratoire

d'Immunotechnologie et Réactifs

 
 
 

Biologiques

Figure 1: Symptômes de la rubéole ( www.larousse.fr) 2

Figure 2: Un enfant atteint de rubéole congénitale (Lasek-Duriez et al., 2008) 4

Figure 3: Représentation schématique du virus de la rubéole (Guillet, 2010) 6

Figure 4: Virus de la rubéole au microscope électronique (Bienvenu et al., 2004) 6

Figure 5: Représentation du génome de la rubéole (Bienvenu et al., 2004) 9

Figure 6: Réplication du virus de la rubéole (Bienvenu et al., 2004) 10

Figure 7: Cinétique d'apparition des anticorps lors d'une infection et réinfection

rubéolique ( www.microbe-edu.org) 11
Figure 8: Détection du virion de la rubéole dans les cellules BHK21 (Risco et al.,2003).....

14
Figure 9: Cellules VERO et BHK21 infectées par le virus de la rubéole. (Risco et al.,

2003) 14
Figure 10: Technique de détection de l'infection rubéolique a partir du liquide amniotique

de foetus par PCR et electrophorese RT-PCR(A),Nested PCR(B) (Bienvenu et al.,2004) 16

Figure 11: Contrôle de stérilité 22

Figure 12: Milieu DMEM 23

Figure 13: SVF 24

Figure 14: Antibiotiques 24

Figure 15: Tryptose phosphate 25

Figure 16: Trypsine 25

Figure 17: Contrôle de stérilité du milieu de culture et additifs 26

Figure 18: Observation microscopique des cellules BHK21 27

Figure 19: Décongélation des cellules BHK21 28

Figure 20: Observation microscopique des cellules BHK21 dans la flasque 150cm2 29

Figure 21: Incubation dans l'étuve à 37°C 29

Figure 22: Passage des cellules BHK21 30

Figure 23: Inoculation du virus 30

Figure 24: Lot d'hémagglutinine 31

Figure 25: Titrage de l'hémagglutinine rubéolique 32

Figure 26: Lavage par le Tampon PBS Tween de la plaque ELISA 35

Figure 27: Incubation du sérum des malades 35

Tableau 1: Résultats de titrage de l'HA 37

Tableau 2: Test numéro 1 . 38

Tableau 3: Test numéro 2 . 39

Tableau 4: Test numéro 3 .. 40

Tableau 5: Test numéro 4 . 41

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