6.2-DOSAGE DES IgG :
Principe :
-Le principe du dosage associe la méthode
immunoenzymatique par immunocapture à une détection finale en
fluorescence (ELFA).
-Le cône à usage unique sert à la fois de
phase solide et de système de pipetage. Les autres réactifs de la
réaction immunologique sont prêts à l'emploi et pré
répartis dans la cartouche (Tableau n°6).
-Toutes les étapes du test sont réalisées
automatiquement par l'instrument.
Elles sont constituées d'une succession de cycle
d'aspiration/refoulement du milieu réactionnel.
-Dans une première étape l'échantillon
est dilué, puis aspiré et refoulé à
l'intérieur du cône .les anticorps anti-T.gondii présents
dans l'échantillon vont se fixer aux antigènes T.gondii
fixées à l'intérieur du cône.
-Des étapes de lavage éliminent les composés
non fixés .au cour de la seconde étape des IgG monoclonales
(souris) anti-IgG humaines conjuguées à la phosphatase alcaline
sont aspirées et refoulées à l'intérieur du
cône et vont se lier aux IgG humaines fixées sur
l'antigène.
-Lors de l'étape finale de révélation, le
substrat (4-méthyl-ombelliferyl phosphate) est aspiré puis
refoulé dans le cône ; l'enzyme du conjugué
catalyse la réaction d'hydrolyse de ce substrat en un produit
(4-méthyl-ombelliferone)
dont la fluorescence émise est mesurée à 450
nm .la valeur du signal de fluorescence est proportionnelle à la
concentration de l'anticorps Présent dans l'échantillon.
-A la fin du test, les résultats sont calculés
automatiquement par l'instrument par rapport à une courbe de calibration
mémorisée, puis imprimés et sont interprétés
dans le tableau n°7 (FORTIER et al., 1990).
Tab. n° 6 : Description de la
cartouche des IgG(FORTIER et al.,1990) :
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Puits
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réactifs
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1
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Puits échantillon
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2
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Diluant sérum : tampon TRIS (50mmol/l) PH 7 ,4
+stabilisants protéiques et chimiques+azoture de sodium 0,9g/l
(600ul)
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3
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Tampon de prélavage : TRIS (80mmol/l) pH 7,4
+stabilisants protéiques et chimiques+azoture de sodium 0,9g/l
(600ul)
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4-5-7-8
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Tapon de lavage : TRIS (50mmol /l) pH 7,4+ stabilisants
protéiques et chimiques +azoture de sodium 0,9g/l(400ul)
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6
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Conjugué : anticorps monoclonal anti-IgG humaines
(souris) marqué à la phosphatase alcaline + azoture de sodium 0,9
g/l (400ul)
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9
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Diluant sérum : tampon TRIS (50mmol/l) pH7,4 +
stabilisants protéiques et chimiques + azoture de sodium 0,9g/l
(400ul)
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10
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Cuvette de lecture avec substrats : 4- méthyl-
ombelliferyl
Phosphate (0,6mmol/l) +diéthanolamine (DEA*) (0,62 mol / l
soit 6,6%, PH 9,2) + azoture de sodium 1g/l (300ul)
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Tab.n°7 : Normes utilisés pour
le dosage des IgG (FORTIER et al., 1990) :
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Titre (UI/ml)
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Interprétation
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< 4
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Négatif
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4 = TITRE =8
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Equivoque
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= 8
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Positif
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Fig. n°16 : La photo de L'appareil mini
VIDAS (BIOMERIEUX).
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