3. Extraction des composés
phénoliques
Principe
La méthode d'extraction utilisée pour les
composés phénoliques est celle de. L'objectif de l'extraction
est de séparer les substances phénoliques de la poudre solide, le
solvant dissous le principe actif à l'intérieur du solide et
l'entraîner à l'extérieur.
Le choix du méthanol possède l'avantage
d'être facilement éliminé sous vide et il donne en plus un
meilleur rendement d'extraction qui dépasse celui obtenu avec l'eau de 7
fois. Le rendement d'extraction en polyphénols augmente
avec le temps de contact (Djeridane et al, 2006).
Mode opératoire
· 5 g obtenu sont ensuite macérés dans
100ml d'un mélange hydro-alcoolique MeOH (méthanol-eau)
(80/20=v/v) pendant 48 heures à une température ambiante.
· Ce mélange est filtrer par papier whatman.
· Le résidu obtenu est repris pour une
deuxième fois avec un volume de 50 ml du même mélange
hydroalcoolique pendant 24 heures à température ambiante.
· On obtient donc un extrait hydroalcoolique brut.
· On évapore le méthanol par rota vapeur
à 65 °C.
· On obtient un extrait phénolique conservé
à 6°C jusqu'à utilisation.
3.1 Analyses biochimiques
3.1.1 Dosage des polyphénols totaux
Le dosage des polyphénols totaux dans les
extraits des deux échantillons a été effectué par
spectrophotométrie selon la méthode du réactif de Folin -
Cicalteu (Singleton et al, 1999).
Principe
Ce dosage est fondé sur la quantification de la
concentration totale de groupements hydroxyles présents dans l'extrait.
Le réactif de Folin - Cicalteu consiste en une solution jaune acide (Ac)
contenant un complexe polymérique d'ions (hétéro
polyacides). En milieu alcalin, le réactif de Folin - Cicalteu oxyde les
phénols en ions phénolates et réduit partiellement ses
hétéro polyacides d'où la formation d'un complexe bleu
(Daels ,1999).
Mode opératoire
Dans un tube à essai on introduit :
- 0.2 ml d'extrait (préparé dans l'eau
distillée avec les dilutions convenables)
- On ajoute 1 ml du réactif de Folin- Cicalteu
fraîchement préparé (10 fois dilué)
- 0.8 ml de la solution de Na2Co3
à 7.5% (7.5g dans 100 ml)
- L'ensemble est incubé à une température
ambiante pendant deux heures.
- La lecture est effectuée contre un blanc sans extrait
à l'aide d'un spectrophotomètre à 765nm
Expression des résultats
Le taux de polyphénols totaux dans nos extraits a
été calculé à partir d'une courbe
d'étalonnage linéaire (y = ax + b) établie avec des
concentrations précises d'acides gallique Comme standard de
référence, dans les mêmes conditions que
l'échantillon.
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