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Effets du contexte pédoclimatique sur les teneurs en réserves glucidiques chez le peuplier en taillis à  très courtes rotations


par Chloé Morin-Payé
Université d'Orléans - Master 1 2020
  

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3. Echantillonnages

Lors d'une culture en taillis à très courte rotation, les arbres sont coupés à 10 cm du sol. De la souche repartent alors plusieurs tiges (rejets de souche) plus ou moins épaisses qui seront de nouveau coupées deux à quatre ans plus tard (Figure 2). L'échantillonnage a été réalisé à partir d'un morceau du tronc du brin dominant en sortie d'hiver 2018 (pour ECH) et 2019 (pour SCV). Les taillis avaient alors neuf ans et avaient déjà subi deux rotations. Le tronc des arbres fait partie des organes pérennes pouvant stocker l'amidon et les sucres solubles qui s'accumulent en fonction des saisons (Sauter & Neumann, 1994 ; Sauter & van Cleve, 1994). Les échantillons ont été conservés dans de la carboglace sur le terrain, puis au congélateur (à -20°C) avant d'être lyophilisés et réduits en poudre fine. À noter que l'écorce n'a pas été enlevée avant le processus.

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Figure 2 : Schéma explicatif de la culture en taillis à très courte rotation

4. Dosage des glucides non structuraux

Le détail des protocoles est disponibles en Annexe 2. Sucres solubles

Le protocole suivant a été adapté à partir des travaux de Monsigny (1988). Pour chaque échantillon, 20 mg de poudre ont été pesés auxquels on a rajouté 1ml d'éthanol 80%. L'extraction des sucres solubles se faisant à l'éthanol chaud, les tubes ont donc été chauffés à 90°C au bain marie sec pendant 10 minutes puis ont été passés à la centrifugeuse (10900 rpm) durant 10 minutes supplémentaires. Le surnageant contenant les composés solubles a été transvasé dans un autre tube puis l'extraction a été réalisée une deuxième fois afin de récupérer les sucres qui étaient restés dans le culot. Le dosage se fait à partir des deux surnageants préalablement mélangés par un test colorimétrique en plaque multi-puits après incubation à 90°C au résorcinol et à l'acide sulfurique (H2SO4). Les absorbances sont lues au spectrophotomètre à 480 nm.

Amidon

Après avoir récupéré et séché les culots obtenus suite à l'extraction des sucres soluble, de l'á-amylase thermostable et de l'amyloglucosidase (kit Megazyme®) ont été ajoutés pour hydrolyser l'amidon en D-Glucose. Les réactions se font également à chaud (respectivement 90 et 50°C) et le dosage se fait par test colorimétrique en plaque multi-puits avec des triplicats techniques après incubation à 50°C et réaction avec la solution de GOPOD (kit Megazyme®). Les absorbances sont lues au spectrophotomètre à 510 nm.

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