1.4. Matériel de laboratoire
1.4.1. Milieux de culture (Annexe 02)
> Mueller Hinton Agar ;
> Bouillon nutritif ;
> Mac Conkey agar ;
> Gélose nutritive ;
1.4.2. Tests biochimiques et réactifs
> Galerie API 20NE et API 20E. ;
> Test d'oxydase (disques d'oxydases) ;
> Réactif CMT ;
> Réactif Nit 1, Nit 2, James; VP 1, VP 2 et TDA
.
1.4.3. Solutions
> Eau physiologique ;
> Solution d'EDTA 0,5 M, pH 8 ;
> Solution de BET (10 mg/ml) ;
> Solution de violet de gentiane ;
> Solution de lugol (solution d'iodo-iodurée) ;
> Solution de fuchsine .
31
Matériel et Méthodes
1.4.4. Enzymes, Tampons et amorces
> Taq polymérase (5ug/ul) ;
> Tampon TAE 0.5X ;
> DNTP (10 umol) ;
> Amorces : TEM-F ,TEM-R, VIM-F,VIM-R..
1.4.5. Antibiotiques
> Ticarcilline/ acide clavulanique (75/10) ;
> Pipéracilline (75ug) ;
> Imipénème (10ug) ;
> Céfoxitine (30ug) ;
> Aztréonam (30ug) ;
> Amikacine (30ug) ;
> Ciprofloxacine (5ug).
2. Méthodes
Pour une vache donnée, nous considérons 2, 3 ou
4 quartiers atteints comme un seul prélèvement
(un seul cas de mammite).
2.1. Prélèvements
Les prélèvements du lait ont été
réalisés au niveau des élevages, selon les étapes
suivants :
> Désinfecter les mains de l'opérateur et
porter des gants à usage unique ;
> Laver les trayons avec l'eau ;
> Désinfecter les trayons dans l'ordre suivant :
quartier postérieur gauche (QPG), quartier antérieur
gauche (QAG), quartier postérieur droit (QPD) et
quartier antérieur droit (QAD) ;
> Essuyer avec compresse stérile ;
> Eliminer les premiers jets du lait, ouvrir le pot
stérile d'une main en gardant le capuchon
disponible entre le pouce et l'index, puis prélever
environ 10à 15 ml du lait. Ce pot est
immédiatement refermé pour éviter la
contamination ;
> Marquer et identifier chaque pot avec des
étiquettes portant les abréviations du matricule de
vache, du lieu de prélèvement et du quartier
mammaire gauche ou/et droit (QPG, QAG, QPD ou
QAD) ;
> Placer les pots dans la glacière et acheminer vers
le laboratoire. Les échantillons analysés ont
été
conservés à +4°C.
32
Matériel et Méthodes
2.2. Test de mammite de Californie (CMT) (Dudouet, 2004 ;
Salat, 2014)
Le test CMT est également appelé test au
teepol® ou Leucocytest. C'est un test très simple, directement
réalisable en salle de traite par l'éleveur et peu
onéreux, Le résultat est lisible à l'oeil nu et n'est donc
pas quantitatif.
Le test CMT est un test rapide, pas cher et simple pour le
dépistage de la mammite subclinique dans des conditions de terrain. Le
principe du test repose sur l'utilisation d'un corps tensio-actif, le teepol
à 10% et
d'unindicateurdepH,lepourpredebromocrésolàproportionégale,mélangéedansunverrede
montre avec 2 ml de lait. Le teepol est un détergent qui fait
éclater les cellules somatiques et réagit avec leur ADN en
formant un gel dont la viscosité d'autant plus élevée que
la teneur encellule est importante. Ce détergent permet
l'appréciation visuelle de la viscosité du
précipitéobtenuquipermettrad'apparierleniveaud'inflammationdemamelle.Lebromocrésol,indicateur
depH,changedecouleur en fonction de l'acidité du mélange
(Tableau 5).
Tableau 5. Lecture et interprétation du test
CMT
|
Score
|
Interprétation
|
Réaction visible
|
|
0
|
Négatif
|
Mélange fluide
|
|
1
|
Trace
|
Floculat très fin qui disparait après agitation
|
|
2
|
Fiable positif
|
Floculat très net sans tendance à la
gélification
|
|
3
|
Distinct positif
|
Floculat épais avec d'un gel
|
|
4
|
Forte positif
|
Viscosité fortement augmentée. Un gel
cohésif et solide, avec une surface convexe
|
2.3. Enrichissement
Cette étape consiste à ensemencer 1 ml du lait
à l'aide d'une micropipette dans un tube de 5 ml de bouillon nutritive
et incuber à 37°C pendant 24.
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