Lipase
1. Principe de la methode
Nous avons aussi evalue l'effet de nos extraits phenoliques sur
l'activite de la lipase pancreatique porcine.
Cette enzyme hydrolyse l'huile de maIs (poly insature) riche
en triglycerides en produit le glycerol et principalement l'acide linoleique
detectable dans l'UV a 232.5 nm suivant cette reaction (figure V. 3. 1):
H2C-- 0 -- CO -- C (CH2)7 CH
= CH-- CH2 -- CH = CH (CH2)4CH3 H
C-- 0 -- CO -- C (CH2)7 CH = CH-- CH2 -- CH =
CH (CH2)4CH3 H2C-- 0 -- CO -- C
(CH2)7 CH = CH-- CH2 -- CH = CH
(CH2)4CH3
L'huile de ma'is (riche en tri linoleine)
Lipase
CH2-- OH
CH -- OH
3 (CH3
(CH2)4 CH = CH -- CH2 -- CH = CH
(CH2)7 -- COON) +
CH2-- OH
Acides linoleiques Glycerol
Figure V. 3. 1. L'action de la lipase sur
l'huile de maIs.
2. Procedure experimentale
L'analyse des inhibiteurs de la lipase est effectu& par la
mesure de l'absorbance du produit libere puis transforms en une vitesse.
Le milieu reactiormel (3 ml) contient lml de la lipase
pancreatique porcine de concentration 1,1 mg/ml dissout dans le tampon tris 0,2
M de pH = 7,7, 1 ml d'eau distill& et 1 ml d'huile de maIs 5 mg/ ml prepare
dans l'eau et 200 mg de tween 20 (Polyethylene glycol sorbitan monolaurate)
pour la solubilisation de l'huile dans l'eau, le mélange est incube
a 37°C pendant 30 minutes puis la reaction est stopp& par l'ajout de
lml d'ethanol, la lecture est effectu& 232.5 nm contre un blanc depourvu de
l'enzyme.
L'activite inhibitrice des extraits est mesur& de la
méme fawn en introduisant 1 ml de differentes concentrations des
extraits phenoliques.
3. Resultats et discussion
A l'aide des mesures spectrophotometriques realisees sur
l'activite enzymatique de la lipase et comparativement a la representation de
Michaelis-Menten, on apercoit que cet enzyme presente une cinetique
michaelienne.
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E0,025 -
> 0,02 -
0,015 -
0,01 -
0,005 -
0 '
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0 0,001 0,002 0,003
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0,004 0,005
concentration (g/m1)
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Figure V. 3. 2. La cinetique enzymatique de la
lipase.
Les differentes parametres cinetiques de l'enzyme
(Vmax, KM) sont determines selon l'equation en
double inverse de Lineweaver Burk [1/ V = f (1/ S)].
Ze c
E
160 140
120 100 80
60
y = 0,123x + 15,805 R2 = 0,9923/
1/S (ml/g)
Figure V. 3.3. Representation de Lineweaver-Burk
de l'enzyme michaelienne lipase.
A partir de la representation de Lineweaver-Burk de la lipase, la
vitesse maximale Vmax est de 0.0625 AA/min et la constante de
Michaelis KM est de 0.008 g/ml.
Nous avons essaye de tracer les graphes 1/V = f (I) pour tous
les extraits, mais malheureusement nous n'avons pas abouti car un test realise
nous a demontre que les extraits phenoliques etudies absorbent dans la
méme longueur d'onde que l'acide linoleique qu'elle est de 232,5 nm,
pour cela nous avons prefere d'evaluer le pouvoir inhibiteur de nos extraits
vis-a-vis de la lipase par la determination du pourcentage d'inhibition
seulement en appliquant la methode de Qiang .I-1 et al (Qiang
.H et al, 2006), les resultats sont consigns dans le tableau
V. 3. 1 et representes dans l'histogramme (figure V. 3. 4)
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Chapitre V: effets des
extraits phenoliques sur les enzymes
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3. Lipase
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Tableau V. 3. 1. Le pourcentage d'inhibition de
chaque
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plante.
d'inhibition Inhibiteur 2
Pourcentage
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Plante
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Inhibiteur 1
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Inhibiteur 3
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Foulia
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15,60
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21,70
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71,03
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Gondale
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3,40
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32,73
|
21,23
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Lelma
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29,03
|
10,31
|
69,44
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Remth
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11,20
|
11,51
|
70,43
|
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Reguig
|
15,60
|
29,74
|
25
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|
Sen-
|
29,46
|
10,31
|
44,44
|
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Zwadet Elkhrouf
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28,32
|
38,71
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42,06
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% d'inhibition 80 -
60 -
40 -
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q Inhibiteur 1
q Inhibiteur 2
q Inhibiteur 3
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20-
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0
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plante s
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Figure V. 3. 4. Le taux d'inhibition de la
lipase avec trois concentrations d'inhibiteur croissantes ([Ii] <
[12] < [I3]) et une seule concentration de
substrat.
Nous remarquons que parmi les sept plantes seulement "Foulia"
et "Zwadet Elkhrouf' sont des bons inhibiteurs de la lipase, car le taux
d'inhibition augmente en fonction de la concentration des extraits phenoliques
par contre pour les autres extraits aucune relation est remarquee entre la
concentration des extraits et le taux d'inhibition.
Chapitre V: effets des extraits phenoliques sur
les enzymes 3. Lipase
4.
Conclusion
La lipase est une enzyme importante dans le corps humain et
son activation peut étre benefique ou nefaste presente generalement dans
le problême de l'obesite, it y a plusieurs types d'inhibiteurs
synthetiques exemple : -polylysine, parmi les plantes etudiees deux plantes
peuvent étre classees parmi les bons inhibiteurs de la lipase a savoir :
"Foulia" et"Zwadet Elkhrouf'.
Chapitre V: effets des extraits phenoliques sur les
enzymes
Bibliographie
· Anonyme, 2004, Experiment 3: protease
kinetics.
· E. Kokiladevi, A. Manickam and B.
Thayumanavan, 2005, characterization of Alpha-amylase inhibitor in
Vigna sublobata, J Botanical Bulletin of Academia Sinica, Volume 46,
pp 189-196.
· Qiang He, Yuanping Lv, Kai Yao,
2006, Effects of tea polyphenols on the activities of a-amylase,
pepsin, trypsin and lipase, J Food Chemistry, Volume xxx, pp
xxx-xxx.
· R. Bowen, 2006, Polysaccharides
dietetiques : Structure et digestion.
· Sigma Aldrich, 1999, Enzymatic assay of
a- amylase Inhibitor, Sigma quality control test procedure.
Evaluation de factiviti
antioydante
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