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Régénération via l'organogénèse ou l'embryogénèse somatique chez le Scorpiurus

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par fatima zohra hamdani
Univeristé hassiba ben bouali de chlef - magister 2001
  

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CHAPITRE II MATERIELS et METHODES

1- MATERIEL VEGETAL

1.1- Présentation de l'espèce

1.1.1-Classification de l'espèce

Le Scorpiurus est une plante dicotylédone appartenant à la famille des Légumineuse (troisième grande famille chez les Angiosperme) et la sous famille des Papilionacées, à la tribu Hedysarée et au genre Scorpiurus. La classification du Scorpiurus étudiée par plusieurs auteurs, indique que jusqu'à nos jours, pas de nomenclature claire concernant ces espèces et reste cependant très confuse, en particulier pour l'espèces Scorpiurus muricatus en raison de l'existence d'un polymorphisme morphologique. De ce fait de nombreuses classifications sont proposées (BATTANDIER et TRABUT, 1890 ; JULIEN,1894 ; JAHANDIEZ et MAIRE 1932 ; FOURY, 1954 ; LE HOUEROU, 1959 ; NEGRE, 1961; QUEZEL et SANTA, 1962 et DOMINGUEZ et GALIANO,1974) se basant essentiellement sur l'étude de caractères morphologiques.

Pour notre travail , nous retiendrons la classification de DOMINGUEZ et GALIANO,(1974 ).

· Scorpiurus vermiculatus est la forme sauvage la plus stable du genre Scorpiurus (2n=14);

· Scorpiurus muricatus :Cette espèce regroupe des plantes annuelles (2n=28), au sein du quel on distingue:

- Scorpiurus muricatus ssp subvillosus . L

- Scorpiurus muricatus ssp eumuricatus . L

- Scorpiurus muricatus ssp sulcatus .L

1.1.2 -Les caractéristiques biologiques de la plante

Le Scorpiurus est une plante annuelle , autogame. Elle présente au stade plantule de grands cotylédons qui prennent l'aspect d'un axe dressé, lancéolé et atténue progressivement en pétiole. Les premières feuilles qualifiées de primordia foliaires sont entières et sont disposées sur un court hypocotyle en rosette lâche. La tige est rampante et dont la taille peut atteindre , les 40 à 50 cm de longueur avec un large recouvrement végétal. Les feuilles sont grandes, entières et de forme ovales (BENSALEM et al.,1990; YOUNSI , 1996 ).

La floraison débute vers le mois de mars et s'étend jusqu'a mai .Les graines en nombre de (9 à 11) sont pourvues d'un tégument très dur causant ainsi la dormance tégumentaire (BATTANDIER et TRABUT, 1890 ; NEGRE, 1990 ).

la différenciation morphologique entre les espèces est généralement décelable au moment ou les plantes atteignent le stade adulte (Planche 1).

* Scorpiurus vermiculatus

L'espèce est dotée d'un système racinaire pivotant, puissant et atteignant parfois 1.0 mètre de taille (OUZZANE et ABEDELGUERFI, 1989).

Les fleures sont grandes, à pétales jaunes ou parfois rougeâtres. Elles sont généralement solitaires. Les fruits sont des gousses, grosses ,repliées sur elles- mêmes en spires régulières . Elles sont couvertes de tubercules , élargies au sommet en forme de chapeau et couvertes d'épines en écusson (BATTANDIER et TRABUT, 1890  ; NEGRE,,1961; CARENE, 1992).

*- Scorpiurus muricatus

Les fleurs sont de petites tailles , groupées en inflorescence (2 à 5 fleurs) et portées par de longs pédoncules. Les fruits sont des gousses enroulées de façon irrégulière et se décomposant en articles à maturité. Cependant on note la présence d'aiguillons au niveau des gousses chez le Scorpiurus muricatus ssp sulcatus alors qu'ils sont absent chez le Scorpiurus muricatus ssp subvillosus (BATTANDIER et TRABUT, 1890 ; JULIEN, 1894  ; NEGRE,,1961; CARENE, 1992).

1.1.3- Répartition géographique

Bien que l'origine de Scorpiurus soit obscure et sa classification peu claire . C'est une espèce très connue par les agriculteurs communément appelés cheniettes , Tagourit ou El ghagfa . Elle est citée comme mauvaise herbe .

On signale sa répartition dans le monde entier. On la rencontre, en plus du Nord africain , en Australie , en Amérique du nord et aussi sur le basin méditerranéen (les Iles Canaries, Sud du Portugal, l'Espagne, Centre de l'Italie, Malta, Sud-ouest de la France, la Grèce) ; mais dont les conditions pédoclimatiques différent d'une espace à une autre, ZIELINSKI,(1991) .

En Algérie, certains auteurs comme BATTANDIER et TRABUT, (1890 ) trouvent que le Scorpiurus vermiculatus et Sscorpiurus muricatus ssp subvillosus sont présent pratiquement dans toute la partie Tell de l'Algérie. Ils poussent préférentiellement bien dans les régions bien arrosées, de faible altitudes, sur sol à texture fine et pauvre en calcaire total. Alors que d'autres comme JAHANDIEZ et MAIRE (1932), limitent leurs présence aux zones de pâturages de type argileux, et sablonneux des plaines et plus rarement sur les régions des bases montagnes .

Quant au Scorpiurus muricatus ssp sulcatus , il semble moins exigeant sur le plan nutritionnel et pédologique (BENSALEM et al.,1988). Il parait effectivement s'accommoder d'habitat différent , on a signalé sa présence sur les terres argileuses de Constantine, lieux herbeux et pentes des collines JULLIEN (1894). Par contre BENSALEM et al (1990) indique l'avoir rencontré dans plusieurs régions en Algérie (figure 3).

2-CONDITION DE CULTURE DES PLANTES MERE ET OBTENTION DES EXPLANTS.

2.1- Origine des graines

Au cours de cette étude, huit génotypes d'origine, très diverses ont été utilises afin d'éviter tout apparentement entre eux. Ils sont issus de huit populations de Scorpiurus distantes les unes des autres de 50 à 800 km et qui ont été récolté dans les régions nord du pays : Miliana - Alger- Médéa -Bejaia - Tébessa - Skikda - Barika et Annaba .

* Trois génotypes appartiennent à Scorpiurus vermiculatus (V6- V12-V13 ) ;

* Trois autres génotypes appartiennent à Scorpiurus subvilusus (B1--B6-B8) ;

* Et les deux génotypes appartiennent à Scorpiurus sulcatus(L26-L3).

Toutes les semences employées dans notre étude, nous ont été aimablement fournies par Mer.M'HAMMEDI BOUZINA enseignant chercheur à l'institut agronomique de Chlef. La récolte des graines à été faite lors des différentes sorties de prospections effectuées dans le cadre d'une collaboration INA EL Harrach, INA Paris et ICARDA de Syrie.

2..2-Scarification des graines

Les graines de Scorpiurus présentent un faible pourcentage de germination suite à une dormance tégumentaire. Selon WHITE in COME (1970), la cuticule et une partie des cellules palissadiques empêchent la pénétration de l'eau chez certaines graines de Llégumineuses. Pour surmonter cet obstacle, les graines ont été scarifiés graine par graine, à l'aide d'une planche en bois recouverte de papier verre et d'une lime métallique. Celles ci étant perméable à l'eau germent plus facilement.

2.3-Explants provenant de jeunes plantes cultivées in- vitro

Les graines sont désinfectées dans une solution d'hypochlorite de calcium concentrée à 7% et d'ISIS liquide (un détergent liquide équivalent au domestos) à 4% pendant 25 ;minutes. Après plusieurs rinçage à l'eau distillée stérile, les graines sont mises, aseptiquement, à germer sur milieu gélosé (0,8%), à l'obscurité pendant huit jours, les plantules présentent les caractéristiques suivantes.

A

B

C

E

D

F

Planche 1:(A) - Jeune plantule de Scorpiurus au stade de 25 jours .(B) -Plante adulte de Scorpiurus au stade floraison .(C) - Fruit en gousse de Scorpiurus muricatus. (D) - Graine de Scorpiurus muricatus.. (E )- Fruit en gousse de Scorpiurus vermiculatus .(F) - Graine de Scorpiurus vermiculatus

· Une seule racine bien développée fine de 3-4 cm de longueur chez Scorpiurus muricatus, épaisse et courte de 0,5-1 cm de longueur chez Scorpiurus vermiculatus.

· Un hypocotyle blanc de 9 à 13 cm de longueur chez Scorpiurus muricatus et de 4 à 5 cm chez Scorpiurus vermiculatus.

· Deux cotylédons jaunes de 0,9- 1,5 cm de longueur.

2.4-Explants provenant de plantes cultivées en pots

Les graines scarifiées sont d'abord trempées dans l'eau pour imbibition, pendant 24 heures , afin de permettre une meilleure alimentation en eau et en oxygène de l'embryon et par conséquent une germination facile et rapide puis on les sème dans des pots en raison de 2 graines / pot à une profondeur de 1 à 2 cm. Les explants cotylédons, tiges, apex ,pétioles et feuilles sont prélevées dans ces conditions à partir de plantules âgées de 20-25 jours.

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