Memoire Online - Analyse bactériologique des saucissons vendus dans les alimentations de la ville de Kisangani dans la commune Makiso

Le prélèvement des échantillons a été fait au niveau des alimentations que nous avons ciblées. Après prélèvement, 1g d'échantillon a été dilué, homogénéisé dans 9ml d'eau physiologique stérile dans un tube à essai. En suite une série des dilutions décimales a été réalisée jusqu'à 10^-3

Un milli litre de la dilution 10^-3 est enrobé dans la gélose nutritive contenue dans une boite de Pétri. Après incubation, à 37°C pendant 24 heures, les colonies ont été dénombrés par comptage direct. Nous avons effectué cette opération à raison de deux boites par échantillon.

Les colonies ayant servi au dénombrement ont été repiquées dans la gélose molle et gardée à la température du laboratoire

- Couvrir la lame par le cristal violet pendant 60 secondes, puis la rincer à l'eau ;

- Recouvrir la préparation avec le Lugol pendant 60 secondes et rincer de nouveau ;

- Décolorer à l'alcool pendant #177; 3 secondes et laver rapidement à l'eau ;

Après séchage, observation au microscope à l'objectif à immersion. Les bactéries à Gram^-sont colorées en roses ou orange et celles de Gram⁺ en bleu ou violet.

Les caractérisations biochimiques et physiologiques étaient faite à travers le milieu de Kligler. Elle nous a permis de caractériser les bactéries après la mise en évidence du glucose, de la lactose, de la production du sulfure d'hydrogène et du gaz. Pour procéder à cette caractérisation, nous avons ensemencé les différentes souches à étudier par piqûre dans le culot et par strie sur la pente de la gélose de Kligler inclinée. (MARCHAL1997). Ces résultats sont liés :

a) A la fermentation du glucose : le culot est rouge jaune s'il y a fermentation. S'il n'y a pas de fermentation du glucose et le culot est rouge.

b) A la fermentation de la lactose : Si la pente du milieu incliné est rouge il n'y pas fermentation de la lactose. Si c'est jaune c'est positif, il y a fermentation du lactose.

c) A la production du gaz : Si c'est positif, on voit l'apparition des bulles d'air ou cassure d'agar de Kligler. Pas des bulles, le résultat est négatif.

d) A la formation de Sulfate d'hydrogène : Si c'est positif on voit la formation d'un anneau noir qui contourne le culot, s'il n'y en a pas c'est négatif.

A travers ses différents renseignements on peut directement identifier la bactérie à partir d'un tableau synoptique offrant les différentes combinaisons liées à la positivité ou à la négativité d'un résultat. Ce tableau, peut être représenté de la manière ci-dessous :

Tableau 8 : Tableau d'identification des bactéries à partir des résultats optenus par le milieu de Kligler

Bactérie correspondante	Formation de glucose	Fermentation du lactose	FormationdeH₂S (Sulfated'hydrogène)	Production du Gaz
Citrobacter freundii	Positive	Positive	Positive	Positive
Alcali gènes Pseudomonas spp	Negative	Negative	Negative	Negative
Achromobacter spp Escherichia coli Klebsiella spp Citrobacter inermedium	Negative	Positive	Negative	Positive
Providencia spp Proteus morganii Proteus rotgeri Salmonella typhi	Positive	Negative	Negative	Positive
Proteus vilgaris Arizona spp Proteus mirabilis Citrobacter	Positive	Negative	Positive	Positive
Shigella spp Serratia spp	Positive	Negative	Negative	Negative

Il consiste à la détermination de la sensibilité d'une bactérie aux antibiotiques. Pour l'effectuer on prépare des disques qui son des rondelles de cellulose de 7mm de diamètre. On prépare aussi une série d'antibiotiques qu'on soumet dans des tubes stériles à raison des doses prévues par antibiotiques.

Dans le cadre de cette recherche nous avons utilisées 7 antibiotiques. Ces antibiotiques sont : L'augmentin, le ciproxin, le negram, le cefatoxe, l'érythromycine et la chloxacilline. Ces antibiotiques sont représentés à travers la photo 1 ci-dessous selon l'ordre précité.

L'étude de la sensibilité des bactéries est faite par la méthode de diffusion sur gélose de Muller Hinton. Cette méthode consiste à déposer les disques imbibés de solution d'antibiotique sur une gélose de Muller ensemencée.

L'antibiotique contenu dans le disque va diffuser suivant un gradient de concentration et les bactéries ne ses développent pas pour les concentrations supérieures ou égales à la concentration minimale inhibitrice. On obtient une zone d'inhibition autour du disque plus ou moins grande selon la sensibilité de la souche et le pouvoir de diffusion de l'antibiotique. Cette pratique est couramment utilisée dans les laboratoires biomédical (Biomerieux, 1989, Monica, 2000).

L'effet des antibiotiques sur les germes est mis en évidence par l'apparition des zones d'inhibition. On considère comme zone d'inhibition, le halo clair autour des disques où il y a absence totale de croissance. Ainsi, la sensibilité des bactéries aux antibiotiques est appréciée en mesurant le diamètre de zone avec un compas ou une latte. La valeur obtenue est comparée à celle du diamètre critique de l'antibiotique:

· Le diamètre de la zone d'inhibition est inférieur au diamètre critique: conclure résistant;

· Le diamètre de la zone d'inhibition supérieur au diamètre critique:conclure sensible;

· Les réponses intermédiaires sont assimilées aux résistants (Institut Pasteur, 1983 ; Monica, 2000).

D'après les antibiotiques que nous avons utilisés les diamètres des zones d'inhibitions ont été mesurés (en mm) et consignés dans le tableau 9, ci-dessous :

N°	ANTIBIOTIQUES	RESISTANT	INTERMEDIAIRES	SENSIBLES
1	Augmentin	14	14 - 20	21
2	Cefatox	14	15 - 22	23
3	Ciproxin	15	16 - 20	21
4	Chloxacilline	20	#177;	20
5	Erythromycine	13	14 - 22	23
6	Negram	13	14 - 18	19
7	Rufampicine	14	14 - 18	19

Analyse bactériologique des saucissons vendus dans les alimentations de la ville de Kisangani dans la commune Makiso

CHAPITRE DEUXIEME : MATERIEL ET METHODES