Annexe 10: Mode opératoire du
dénombrement des levures et moisissures.
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GIC JGEPROL
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Réf : MO.MAL010_DLM
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Révision : 00
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Mode opératoire du dénombrement des
levures
et moisissures.
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Date : Aout 2014
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I. Objet
Cette méthode est utilisée pour le
dénombrement des levures et moisissures présents dans les
échantillons.
II. Définitions
Cette technique est basée sur détermination de la
concentration des levures et moisissures contenus dans la préparation
initiale. Elle nécessite une ou plusieurs dilutions décimales (au
dixième) et une incubation à la température 28°C
pendant 24 à 48 heures
III Principe
Un volume connu (0.1ml) de produit pur ou de dilution au
10-1 et 10-2 est inoculée par incorporation dans
10ml d'un milieu sélectif (Sabouraud). On compte les colonies,
après étuvage à la température de 28°C pendant
24 à 48 heures.
IV. Domaine d'application
Le laboratoire d'analyse contrôle qualité
V. Reference NF ISO 7954
VI. Réactifs et produits
Eau peptoné tamponné
Gélose Sabouraud
Alcool
VII Matériel
Tube à essais
Boite de pétri en verre
Etuves
Bec de bunsen
Pipette pasteur
l'anse de platine
Compteur de colonie
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xv
CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE
DU GIC JGEPROL
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GIC JGEPROL
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Révision : 00
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levures
et moisissures
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Date : Aout 2014
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VIII. Mode opératoire
? Effectuer un prélèvement du produit dans les
conditions strictement stériles.
? Diluer l' L'echantillon au 10-1 et 10-2
avec de l'eau peptoné
? Couler aseptiquement dans les mêmes boites de
Pétri, environ 10 ml de milieux Sabouraud et laisser solidifier le
milieu sur la paillasse 10min
? Prélever aseptiquement chaque dans chaque tubes 0,1
ml des dilutions 10-1 et 10-2 qu'il faut déposer
dans deux boites de Pétri différentes, puis incuber à
28°C pendant 24 à 48 heures.
? Lecture : Les colonies sont comptées à l'aide
du compteur de colonies ou du microscope
IX. Interprétation des
résultats
Il ne faut pas que le nombre d'UFC soit trop important (< 100
en cas d'agent de différenciation des colonies)
Les résultats seront rendus en écriture
scientifique avec deux chiffres significatifs
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Volume de l'inoculum: 1 mL
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Nombre d'UFC
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1ère boîte
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1ère boîte
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Produit pur : 100
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> 100
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> 100
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Dilution 10-1
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104
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87
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Dilution 10-2
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20
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38
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Dilution 10-3
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6
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2
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Cohérence inter-dilutions (on attend un facteur 10).
On prend la dilution pour laquelle il y a le moins d'incertitude.
On tient compte ici de la dilution 10-1 : donc 85 bactéries
par mL à 10-1
La concentration bactérienne dans le produit doit pur doit
être > 1000,0.10-1bactéries par
mL.
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xvi
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