CHAPITRE 3 : RESULTATS ET DISCUSSION
D'après les diagrammes de contour obtenus
(figure 11), il apparaît clairement que les plus fortes
valeurs de l'activité lipasique (Activité > 140), sont
atteintes lorsque les facteurs sont fixés à des valeurs proches
de leur niveau haut de l'espace expérimental. La valeur précise
de l'optimum théorique, correspondant à la valeur maximale de
l'activité. Les valeurs des facteurs permettant de l'atteindre ont
été déterminées à l'aide de la fonction
«désirabilité» du logiciel (figure
13).
Figure 13: Optimisation de l'activité
par la fonction Désirabilité.
Comme le montre la (figure 13), la valeur de
l'activité maximale estimée par le modèle (A = 179),
correspond aux valeurs des facteurs suivants :
- T = 45,76 °C
- Temps = 4,56 joures - Tween 80 = 3,24 g/l
Ces conditions expérimentales de cultures
déterminées théoriquement pour la production de la lipase
issue de souche locale Cpt29 ont été par la suite
appliquées expérimentalement. La valeur de l'activité
trouvée expérimentalement (A = 182 U/ml) est nettement
supérieure à la valeur théorique. Ce résultat
valide donc le modèle obtenu.
Ces résultats obtenus montrent que la lipase extraite
de souches d'Actinomycète thermophile Cpt29 est plus thermostable (Top
46°C) en comparaison la lipase Yarrowia sp. ATCC 8661 issue de
souches bactériennes type Pseudomonas strains dont la
température optimale de culture est évaluée à
37°C (L.Tcacenco et al .,2010 ).
Les activités de ces deux lipases ont été
aussi comparées et nous avons trouvé que
l'activité hydrolytique de la Cpt 29 (182 U/mL) est
relativement deux fois supérieure à celle de la lipase
Yarrowia sp. ATCC 8661(106U/mL) (L.Tcacenco et al
.,2010 ) .
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CONCLUSION
Au cours de ce travail, nous avons étudié
l'activité enzymatique d'une lipase bactérienne issue de souche
locale d'Actinomadura keratinilytica strain cpt 29) extraite au
laboratoire de Biochimie et Microbiologie Appliquée (LBMA) et dont la
caractérisation chimique a été réalisé au
sein du laboratoire de Chimie Organique Appliquée (LCOA).
La première partie de ce manuscrit est consacrée
à une présentation bibliographique sur les actinomycètes
en général ainsi qu'un aperçu sur les enzymes lipidiques.
La seconde partie du document développe les méthodes
utilisées et les résultats obtenus relatifs aux
différentes étapes de ce travail à savoir l'extraction,
l'isolement de l'enzyme lipidique et l'optimisation de la production de
l'enzyme.
La deuxième partie de ce travail consiste à
décrire les méthodes expérimentales utilisées ainsi
qu'a exposé les résultats et les discussions de cette
étude. La première étape concerne l'exploitation de la
souche bactérienne productrice de lipases d'Actinomadura
keratinilytica strain cpt29. L'opération d'identification et
d'extraction d'enzyme de cette souche, est réalisée au
laboratoire de Biochimie et Microbiologie Appliquée
(LBMA)-université Badji Mokhtar-annaba. La seconde étape,
concerne la recherche et l'étude de l'activité lipasique de cette
enzyme ainsi que l'optimisation des conditions expérimentales de culture
qui donne le meilleur taux de production. Cette partie du travail a
été réalisé au sein du laboratoire de Chimie
Organique Appliquée (LCOA), groupe Biocatalyse et Synthèse
Organique (BCSO).
Au cours de ce travail, nous avons réussi à
extraire des lipases de souches locales d'Actinomadura keratinilytica strain
cpt29. Pour bien mener notre étude, nous avons fait appel à la
méthodologie des plans d'expériences qui nous a permis d'aboutir
aux résultats recherchés de manière efficace.
Les facteurs influençant potentiellement la production
de cette lipase (température, temps, pH, source de carbone (Tween80),
[FeSO4], [CaCl2], [MgSO4], [K2HPO4], [KH2PO4], [NaCl], [(NH2)4SO4]) et leur
impact sur le fonctionnement de l'enzyme, ont été
étudiés dans un premier temps avec un plan de criblage, le plan
de Plackett et Burman qui nous a permis de dégager les facteurs les plus
influents sur l'activité enzymatique, à savoir la
température, le temps et la source de carbone (Tween 80). Les
résultats de ce plan préliminaire ont également
montré qu'un modèle de second degré est nécessaire
en particulier pour l'optimisation de la réponse.
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