6- Electrophorèse
sur gel de polyacrylamide en présence de SDS
L'analyse par électrophorèse, de certaines
fractions protéiques issues de la dernière étape sur gel
de polyacrylamide dans les conditions dénaturantes, montre que la LDC
se présente sous forme d'une seule bande de masse moléculaire 65
kDa (figure 6).
MT P1 P2 P3
96 kDa
67 kDa
43 kDa
30 kDa
20 kDa
14 kDa
Figure 6 :Electrophorèse sur gel de
polyacrylamide à 12 % dans les conditions dénaturantes. Les
échantillons (5U chacun) sont précipités par deux volumes
d'acétones, le culot est ensuite repris dans le tampon
dénaturant. MT : marqueur de taille ; P1, P2, P3 :
fractions 57, 58 et 59 issues de la dernière étape de
chromatographie.
7- Bilan de purification de
la lipase de crabe vert
Tableau 3 : Le Bilan de purification de la
LDC.
|
Etape de purification
|
Activité totale
(UT)
|
Protéines
(mg)a
|
AS
(UI/mg)
|
Rendement
|
Facteur de
purification
|
|
Homogénat
|
1500
|
16.5
|
3.03
|
100
|
1.00
|
|
Traitement T=60°C, 10 min
|
1200
|
1.96
|
12.2
|
80
|
4.02
|
|
DEAE cellulose
|
800
|
0.61
|
82
|
54
|
27
|
|
Précipitation
(NH4)2SO4 60%
|
500
|
0.48
|
104
|
34
|
34.3
|
|
Séphacryl S-200
|
300
|
0.07
|
210
|
20
|
69.3
|
|
Mono Q-Sépharose
|
150
|
0.05
|
500
|
10
|
165
|
a : le dosage des protéines est effectué
par la méthode de Bradford (1976)
| 
