3) Conclusions
Bien que plusieurs études aient montré
l'importance de KIN17 dans la réplication et la réponse
cellulaire aux dommages de l'ADN, les fonctions précises
et les partenaires biologiques de cette protéine nucléaire
demeurent à ce jour inconnus. Dans le cas de KIN17, l'utilisation de
logiciels bio-informatiques a permis de caractériser son
organisation en plusieurs domaines structuraux qui semblent
associés à différentes fonctions. Dans l'état
actuel des connaissances, la caractérisation structurale de KIN17
apparaît indispensable dans l'optique de progresser vers la
détermination de son rôle dans la régulation et la
maintenance
de l'ADN, de ses partenaires, et de ses modes d'action.
C'est pourquoi, le Laboratoire de Structure des Protéines du
CEA de Saclay (LSP) a entrepris une approche structurale par RMN et
cristallographie des rayons X qui a pour objectif de
résoudre la structure tridimensionnelle de la protéine
KIN17 humaine. En raison de difficultés rencontrées pour
surexprimer la protéine entière, cette caractérisation a
été abordée par domaine. Sur la base des analyses
bio-informatiques présentées précédemment, et
à partir des diagrammes de prédiction de structure
secondaire et de visualisation des amas de résidus
hydrophobes
(analyse HCA), trois domaines de la protéine KIN17 humaine
ont été sélectionnés :
- Domaine K1 : région 270-390 contenant le module
prédit KOW
- Domaine K2 : région 51-160 contenant le motif
prédit FF
- Domaine K3 : région 1-160 contenant le motif
prédit C2H2 et le domaine K2
En parallèle, une approche biochimique fonctionnelle a
également été initiée afin de rechercher les
partenaires biologiques de KIN17 et de chacun de ses 3 domaines structuraux.
Dans le cadre de ce projet, nous avons entrepris une
collaboration avec les chercheurs
du LSP afin de contribuer à améliorer la
connaissance du mode de fonctionnement de la protéine KIN17
humaine, en nous intéressant plus particulièrement au
domaine K2 correspondant à la région 51-160. La
résolution de la structure tridimensionnelle de ce
domaine a ainsi été envisagée par
Résonance Magnétique Nucléaire en solution. Cette
étude a
pour principal objectif d'émettre des hypothèses
sur les fonctions potentielles adoptées par le domaine K2 de la
protéine KIN17 humaine à partir de la connaissance de sa
structure. Des études fonctionnelles d'interaction,
réalisées en parallèle par les chercheurs du LSP
sur les domaines K2 et K3, permettront d'étayer ou d'infirmer nos
hypothèses structurales. A terme, l'interaction du domaine K2 avec un
partenaire biologique pourra être facilement
caractérisée
par RMN, qui est une méthode de choix pour
étudier les dynamiques moléculaires et les
interactions entre molécules.
Chapitre 2 : Production et analyses préliminaires
du domaine K2 de la protéine humaine KIN17
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