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B- Dénombrement des coliformes totaux et
fécaux :
Les coliformes totaux sont des bâtonnets, à Gram
négatif, aero-anaerobis facultatifs, non sporulés.
(J.GUIRAUD, P.GALZY, 1980).
Les coliformes fécaux se distinguent des coliformes
totaux par leur température de prolifération qui est de 44°
C (LAPIED et PETRANSXIENE, 1981).
· Principe:
La colimétrie est l'ensemble des méthodes
permettant la recherche et le dénombrement des coliformes, qui indique
une contamination fécale.
Les coliformes ont la particularité de fermenter le
lactose avec dégagement de gaz. Le développement des coliformes
totaux acidifie le milieu qui se traduit par un virage de l'indicateur
coloré. En outre, une production de gaz apparaît dans les cloches
renversées.
(L. LAPIED, D. PETRANSXIENE, 1981).
· Mode opératoire :
> Ensemencer une série de 9 tubes (avec cloche de
Durham) de BCPL dont 3 tubes en double concentré avec 10 ml
d'échantillon, 3 tubes en simple concentré avec 1 ml, et 3 tubes
en simple concentré avec 0.1 ml.
> Incuber à 37°C pendant 48 h.
> A partir d'un tube positif de BCPL, ensemencer par 1ml un
tube de 10ml contenant l'eau peptonée exempt d'indole + cloche de
Durham.
> Incuber à 44°C pendant 24 h.
> Apres l'incubation, ajouter au tube quelques gouttes de
réactif de KOVACS,
· Expression des résultats:
v' virage de la couleur au jaune avec le trouble et production
de gaz dans la série de 9 tubes.
v' Après l'incubation, on observe une trouble et
changement de couleur dans le tube contenant l'eau peptonée exempt
d'indole, et après l'addition de réactif de KOVACS on observe
qu'il y a production de gaz et un anneau rouge a la surface de tube.
v' Le nombre des coliformes est déterminé avec la
table de Mac Grady. (Annexe N°4).
Eau peptonée
exempt d'indole
Incubation à 37°c/48 h
2à3gouttes de tube
positif de BCPL
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C-recherche des streptocoques fécaux :
Les streptocoques constituent la famille de streptococcaceae
qui regroupe des Genres très fréquents dans l'industrie
alimentaire comme contaminants et surtout comme agents de fermentations
lactique.
Les streptococcaceae sont des coques gram positif, a
sporulées généralement groupées en paires ou
surtout en chaîne de longueur variable, généralement
immobiles. Ils sont catalase négatives, certains pédiocoques
possèdent un pseudo catalase et peuvent apparaître catalase
positives.
La différenciation entre genres est basée sur
l'arrangement des cellules et sur le type de fermentation lactique (homo ou
hétéro lactique).
(Guiraud et Galzy, 1980)
· Principe:
Leur recherche utilise un milieu de présomption de Roth
et un autre de confirmation de l'Eva Litsky en cas d'obtention d'un
résultat positif dans le premier test.
· Mode opératoire :
> Ensemencement d'une série de tubes contenant le
milieu de Rothe > 3tubes de Rothe D/C avec 10ml d'eau.
> 3tubes de Rothe S/C avec 1ml d'eau.
> 3tubes de Rothe S/C avec 0,1ml d'eau.
> Incubation 37°C/48h (présomption).
> La confirmation à partir des tubes positifs.
(virage, trouble du milieu). > Repiquage sur EVA Litsky à
37°C/24h.
· Expression des résultats:
1' Les tubes de Rothe présentant un trouble microbien
sont considérés comme positifs (présence de
streptocoques).
?Présence d'une pastille violette au fond de tube.
10 ml
1 ml
0,1ml
Virage et trouble microbienne de milieu
présence de streptocoques
M.Rothe D/C
Incubation à 37°c/48 h
M.Rothe S/C
2à3 gouttes de tube +
L'eau à analyser
M.Rothe S/C
Repiquage sur EVA-Litsky
Incubation à 37°c/24 h
50
Pastille violette au fond de tube
(Test biochimique)
Figure N°7 : protocole de recherche des
streptocoques fécaux dans l'eau.
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