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Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

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par Antoine A. & Fêmi Jacques H. DANSOU & SETONDJI
Université d'Abomey- Calavi au Bénin - Licence professionnelle en analyses biomédicales 2008
  

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III- IDENTIFICATION DES PRINCIPAUX GERMES DE LA MENINGITE BACTERIENNE [7]

III-1- IDENTIFICATION DE Neisseria meningitidis

On obtient de bon résultat avec des cultures de 18-24 heures. Toujours vérifier la pureté de la culture par une coloration de Gram. Au Gram les méningocoques se présentent comme des diplocoques négatifs ressemblant à des grains de café. Faire si nécessaire des repiquages pour obtenir une culture pure. La recherche de l'oxydase se fait à partir des colonies obtenues sur gélose au sang par le test de Kovac ; on possède ensuite au sérogroupage.

-Test de l'oxydase de Kovac

Le test de l'oxydase permet de mettre en évidence un cytochrome oxydase. Le chlorhydrate de tétraméthyl-p-phenylène diamine est oxydé en un composé violet par les bactéries qui possèdent le système cytochrome C dans leur chaîne respiratoire.

Réalisation du test

A l'aide d'une anse jetable en plastique ou un bâtonnet de bois, prélever un fragment de la colonie et l'étaler sur une bandelette de papier filtre imprégnée. Ne pas utiliser d'anse à nichrome qui peut donner un faux positif.

Lecture des résultats

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

Une coloration violette qui apparaît dans les dix secondes indique une réaction positive. Des réactions plus tardives peu probables avec Neisseria meningitidis. Ce test, utile pour identifier Neisseria meningitidis, peut aussi être positif avec d'autres espèces du genre Neisseria, ainsi qu'avec d'autres espèces bactériennes non apparentées.

-Identification du sérogroupe de Neisseria meningitidis

On connaît actuellement 12 sérogroupes, définir par leurs polyosides capsulaires : A, B, C, H, I, K, L, X, Y, Z, Z' (29E) et W135.

A, B, C, W135 et Y sont les sérogroupes les plus fréquemment isolés au cours des méningites à méningocoque. Le sérogroupe A est la cause la plus fréquente en Afrique et en Asie suivi du sérogroupe C. Les immunsérum pour la détermination des groupes de Neisseria meningitidis sont disponibles dans le commerce.

Réalisation du test

-Nettoyer une lame à l'alcool. Diviser la lame en trois zones de 10 x 4 mm à l'aide d'un crayon gras ou autre marqueur.

-Porter 10 ul de formol à 0,5% salé au bas de chacune des trois zones. -Prélever un fragment de colonie à la surface d'une gélose au sang à l'aide d'une anse stérile, d'une aiguille ou d'un bâtonnet stérile. Emulsionner pour obtenir une suspension légèrement opalescente.

-En haut de chacune des trois zones de la lame, Ajouter 10 ul de chacun des immunsérums choisis dans deux des zones et 10 ul de soluté salin ou de PBS (non formolé) dans la troisième pour servir de témoin. -Mélanger chacun des antisérums et le soluté salin avec la suspension à tester, imprimer à la lame un mouvement de balancier pendant une à deux minutes (le temps peut varier en fonction du fournisseur de l'antisérum). Lire sous un bon éclairage et au dessus d'un fond noir.

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

Lecture des résultats

L'agglutination doit se produire avec un seul des immunsérums et pas avec le soluté salin. L'agglutination en soluté salin caractérise les souches autoagglutinables. L'agglutination avec plusieurs immunsérums en absence d'agglutination avec le soluté salin caractérise les cultures polyagglutinables. L'absence d'agglutination avec l'un ou l'autre des immunsérums et avec le soluté salin caractérise une souche non groupable. Ces résultats sont rares avec l'isolement fraîchement obtenu du LCR ou du sang, mais peuvent se voir occasionnellement. Conserver les immunsérums et le soluté salin PBS au réfrigérateur à 4°C quand ils ne sont pas utilisés.

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"Là où il n'y a pas d'espoir, nous devons l'inventer"   Albert Camus