On obtient de bon résultat avec des cultures de 18-24
heures. Toujours vérifier la pureté de la culture par une
coloration de Gram. Au Gram les méningocoques se présentent comme
des diplocoques négatifs ressemblant à des grains de café.
Faire si nécessaire des repiquages pour obtenir une culture pure. La
recherche de l'oxydase se fait à partir des colonies obtenues sur
gélose au sang par le test de Kovac ; on possède ensuite au
sérogroupage.
-Test de l'oxydase de Kovac
Le test de l'oxydase permet de mettre en évidence un
cytochrome oxydase. Le chlorhydrate de
tétraméthyl-p-phenylène diamine est oxydé en un
composé violet par les bactéries qui possèdent le
système cytochrome C dans leur chaîne respiratoire.
Réalisation du test
A l'aide d'une anse jetable en plastique ou un bâtonnet
de bois, prélever un fragment de la colonie et l'étaler sur une
bandelette de papier filtre imprégnée. Ne pas utiliser d'anse
à nichrome qui peut donner un faux positif.
Lecture des résultats
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
Une coloration violette qui apparaît dans les dix
secondes indique une réaction positive. Des réactions plus
tardives peu probables avec Neisseria meningitidis. Ce test, utile
pour identifier Neisseria meningitidis, peut aussi
être positif avec d'autres espèces du genre Neisseria, ainsi
qu'avec d'autres espèces bactériennes non apparentées.
-Identification du sérogroupe de Neisseria
meningitidis
On connaît actuellement 12 sérogroupes,
définir par leurs polyosides capsulaires : A, B, C, H, I, K, L, X, Y, Z,
Z' (29E) et W135.
A, B, C, W135 et Y sont les sérogroupes les plus
fréquemment isolés au cours des méningites à
méningocoque. Le sérogroupe A est la cause la plus
fréquente en Afrique et en Asie suivi du sérogroupe C. Les
immunsérum pour la détermination des groupes de Neisseria
meningitidis sont disponibles dans le commerce.
Réalisation du test
-Nettoyer une lame à l'alcool. Diviser la lame en trois
zones de 10 x 4 mm à l'aide d'un crayon gras ou autre marqueur.
-Porter 10 ul de formol à 0,5% salé au bas de
chacune des trois zones. -Prélever un fragment de colonie à la
surface d'une gélose au sang à l'aide d'une anse stérile,
d'une aiguille ou d'un bâtonnet stérile. Emulsionner pour obtenir
une suspension légèrement opalescente.
-En haut de chacune des trois zones de la lame, Ajouter 10 ul de
chacun des immunsérums choisis dans deux des zones et 10 ul de
soluté salin ou de PBS (non formolé) dans la troisième
pour servir de témoin. -Mélanger chacun des antisérums et
le soluté salin avec la suspension à tester, imprimer à la
lame un mouvement de balancier pendant une à deux minutes (le temps peut
varier en fonction du fournisseur de l'antisérum). Lire sous un bon
éclairage et au dessus d'un fond noir.
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
Lecture des résultats
L'agglutination doit se produire avec un seul des
immunsérums et pas avec le soluté salin. L'agglutination en
soluté salin caractérise les souches autoagglutinables.
L'agglutination avec plusieurs immunsérums en absence d'agglutination
avec le soluté salin caractérise les cultures polyagglutinables.
L'absence d'agglutination avec l'un ou l'autre des immunsérums et avec
le soluté salin caractérise une souche non groupable. Ces
résultats sont rares avec l'isolement fraîchement obtenu du LCR ou
du sang, mais peuvent se voir occasionnellement. Conserver les
immunsérums et le soluté salin PBS au réfrigérateur
à 4°C quand ils ne sont pas utilisés.
