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Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

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par Antoine A. & Fêmi Jacques H. DANSOU & SETONDJI
Université d'Abomey- Calavi au Bénin - Licence professionnelle en analyses biomédicales 2008
  

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III-2-IDENTIFICATION DE Streptococcus pneumoniae

Sur gélose au sang et gélose chocolat, les colonies de Streptococcus pneumoniae sont petites, grisâtres, muqueuses (en gouttes de rosée) entourées par une zone verdâtre d'hémolyse alpha. Une loupe grossissement 3fois ou un microscope (30x-50x) permet de distinguer les pneumocoques des streptocoques "viridans" alpha hémolytiques. Les types de colonies sont bombés quand elles sont jeunes, mais après 24-48 heures le centre des colonies de pneumocoques se déprime alors que les colonies de streptocoques "viridans" gardent leur apparence. Pour optimiser les résultats, il est recommandé de toujours incuber les boites sous CO2.

-Test de sensibilité à l'optochine

Identification présomptive de Streptococcus pneumoniae consiste à examiner la sensibilité de la souche à l'optochine.

Réalisation du test

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

-Toucher une colonie suspecte alpha hémolytique avec une anse stérile et ensemencer en stries sur la gélose au sang.

-Déposer un disque à l'optochine ou un disque "p" de 6mm de diamètre (contenant 5ug d'éthylhydrocupréine) à l'extrémité de la strie, là où a commencé l'ensemencement. Trois ou quatre colonies peuvent être testées sur la même boite.

-Incuber 18-24 heures à 35°C dans un incubateur à C O2 ou sous une

cloche à bougie.

Lecture des résultats

Les souches alpha hémolytiques présentant une zone d'inhibition supérieure à 14mm sont des pneumocoques. Les souches alpha hémolytiques sans zone d'inhibition sont des streptocoques "viridans"

III-3-IDENTIFICATION DE Haemophilus influenzae

Des petits bacilles ou coccobacilles Gram négatifs, qui ne se cultivent qu'en présence des facteurs x et v, qui poussent sur gélose chocolat et pas sur gélose au sang, qui ont une odeur âcre d'indole et n'agglutinent pas avec un immunsérum anti-méningocoque peuvent être Haemophilus influenzae. En absence de vaccination, la plupart des cas de méningite à Haemophilus influenzae sont de sérotype b.

-Détermination du sérotype l' Haemophilus influenzae

La réalisation du test est comparable à celle décrite pour Neisseria meningitidis, si ce n'est le choix de l'immunsérum. Les isolements de Hib présumés seront testés à la fois avec l'immunsérum anti Haemophilus influenzae type b, un antisérum vis-à-vis de l'un des autres types et un soluté salin. Une forte réaction positive avec l'immunsérum anti-b et l'absence de réaction antisérum dirigé contre un autre type et le soluté

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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et Jacques Fêmi SETONDJI

Utilisation comparée de la gélose chocolat à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la culture de trois espèces bactériennes méningées

salin sont des éléments de présomption en faveur de Haemophilus influenzae type b (Hib). Si l'isolement n'est pas agglutiné par l'antisérum anti-b, il faut le tester avec un antisérum polyvalent. En cas de positivité, tester les sérums monovalents (a, c, d, e, f) pour déterminer le sérotype. Si le résultat est négatif, la souche est probablement non typable. La mise en évidence des besoins en facteur x et v est nécessaire pour confirmer l'identification de Haemophilus influenzae ou envisager une autre espèce de l'Haemophilus.

Réalisation du test

-Faire une suspension opalescente de bactéries dans 10ul de formol à 0,5% salé, après une nuit d'incubation sur gélose chocolat.

-Transférer une anse (5ul) de la suspension bactérienne sur une lame nettoyée à l'éthanol divisée en trois zones.

-Dans chacune des zones ajouter respectivement un même volume d'un antisérum anti-Hib, d'un antisérum spécifique d'un type différent, et de soluté salin.

-Mélanger avec un bâtonnet et agiter doucement la lame par un balancement pendant une minute.

Lecture des résultats

Seules les réactions d'agglutination nette sont considérées comme positives. Les bactéries sont alors agglutinées et le liquide de suspension paraît clair. Si une souche réagit avec plus d'un antisérum, elle est considérée comme non typable.

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