III.4.2 Traitement hypotonique :
La suspension cellulaire est centrifugée pendant 5 mn
à 1400 rpm. le culot est remis en
Suspension délicatement dans 9 ml d'un mélange
hypotonique préchauffé à 37 °C pendant 20
Mn (Figure 25 A).
III.4.3. Fixation
Une préfixation est réalisée en ajoutant
1ml de fixateur (3vol. d'éthanol- 1 vol. d'acide Acétique)
directement dans le milieu hypotonique pendant 5 mn.
La suspension cellulaire est centrifugée 5mn à
1400 rpm et le culot est repris d'abord dans 0,5 ml de fixateur pour bien
homogénéiser la suspension, puis environ 6ml sont ajoutés.
Cette première
fixation dure 30 min à +4 °C. Après une
nouvelle centrifugation pendant 5 à 1400 rpm, le culot est repris dans
6ml de fixateur et les tubes sont laissés à température
ambiante pendant 5 mn afin de réaliser une 2 e m e fixation
(Figure 25 B).
III.4.4. Etalement :
Après fixation et centrifugation, les cellules sont
remises en suspension dans un volume
Minimum de fixateur. La suspension cellulaires peut être
étalé soit sur lame humides, soit sur Lames
sèches (Figure 25 C).
III.4.5. Coloration classique au Giemsa :
La solution de coloration est préparée
extemporanément en mélangeant (Figure 25
D):
- Solution tampon Sorensen pH 6, 8 : 3ml.
- Colorant de Giemsa R : 3 m l.
- Eau déminéralisée : 94 ml.
Les lames sont incubées durant 10 mn dans la solution
à température ambiante, rincées Abondamment à l'eau
courante, puis à l'eau déminéralisée. Elles sont
ensuite séchées à l'air. Les préparations ainsi
colorées sont observées au microscope et muni D'une
caméra.
| 
