VI- Evaluation de la bioconversion par l'enzyme libre et
immobilisée
La recherche de l'efficacité de la bioconversion des
composés phénoliques des margines par l'enzyme immobilisée
par rapport à celle libre a été l'objectif de cette partie
d'étude. En effet, suite à son encapsulation dans des billes
d'alginate de calcium, une quantité de billes immobilisant de l'enzyme
équivalentes à 500 UI/ml de milieu réactionnel
(donnée démontrée dans le chapitre II-III) a
été testé via sa capacité de bioconversion des
composés phénoliques des margines. Un control sans enzyme et un
autre avec l'enzyme libre ont été également
effectués. La réaction a été déroulée
à pH 4,8 durant 2h dans des conditions statiques à 50 C. Les
résultats obtenus sont représentés sur les Fig. 38 et
39.
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Résultats et Discussion
Figure 38: Chromatogrammes CLHP à 280 nm
des extraits de margine avant (a) et après l'hydrolyse enzymatique Libre
(b) et Immobilisée (c) : (1) Hydroxytyrosol; (2) Tyrosol; (3)
Oleuropéine.
Les chromatogrammes CLHP à 280 nm des extraits de
margine ont démontré que la margine brute est pauvre en
hydroxytyrosol (pic 1) dont sa concentration de départ était de
0,065 g/l et riche en composés phénoliques complexes tel que
l'oleuropéine (pic 3). Un changement du profil chromatographique des
extraits de margine a été observé suite à la
bioconversion par les deux formes d'enzyme avec un taux de bioconversion plus
faible observé avec l'enzyme immobilisée qui diminue de 50%.
Cette chute de l'activité enzymatique peut être dûe au fait
de possibles gênes stériques et de limitations dans
l'accessibilité au site actif (Fig. 38; Fig. 39)
Figure 39:Comparaison de la bioconversion par
l'enzyme libre et immobilisée. IV- Conclusion
L'encapsulation de l'enzyme dans des billes d'alginate de
calcium a été utilisée comme la méthode
d'immobilisation envisagée dans cette étude. L'enzyme
immobilisée est montrée efficace jusqu'à 55 °C, sans
fuite d'enzyme observée, mais au-dessus de cette température, la
fonte du support a été observée. Ces résultats ont
montré des modèles grossièrement semblables ont
été obtenu, où le profil du pH et de température
optimum n'est pas significativement changé avec l'immobilisation. Un
changement du profil chromatographique des extraits de margine a
été observé suite à la bioconversion des
composés phénoliques des
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Résultats et Discussion
margines par les deux formes d'enzyme avec un taux de
bioconversion plus faible observé avec l'enzyme immobilisée qui
diminue de 50%.
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Résultats et Discussion
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